一种二代高通量测序的不对称DNA双链接头及其应用

摘要

一种二代高通量测序的不对称DNA双链接头，由两个DNA寡核苷酸单链组成，其制备方法如下：将所述两个DNA寡核苷酸单链溶于淬火溶液中，调整最终浓度达到2mM，体积20微升，然后利用下述条件进行淬火反应，形成局部互补的DNA双链接头：95℃5min；95℃降到12℃，每秒0.1℃；保持在12℃，将退火后的接头溶液1∶4稀释到500μM，并在-20℃保存。其应用采用如下流程：A、不对称DNA接头与DNA样本的连接反应；B、电泳割胶纯化分离未连接的DNA双链接头；C、判断；D、基于不对称序列的PCR放大反应。本发明的显著优势：1)建库起始DNA样品用量低至50纳克、灵敏度提高达100倍；2)建库的接头连接过程可产生100％的有效测序样本等。

主权项

一种二代高通量测序的不对称DNA双链接头，其特征是：所述二代高通量测序的不对称DNA双链接头由两个DNA寡核苷酸单链组成，其制备方法如下：将所述DNA寡核苷酸单链溶于淬火溶液中，调整最终浓度达到2mM，体积20微升，然后利用下述条件进行淬火反应，形成局部互补的DNA双链接头：在95℃中5分钟；95℃降到12℃，每秒0.1℃；保持在12℃，将退火后的接头溶液1∶4稀释到500μM，并在‑20℃保存。