一种提高马铃薯对PVX病毒和PVY病毒双抗性的基因的构建方法

摘要

本发明涉及一种基因的构建方法，具体为一种提高马铃薯对PVX病毒和PVY病毒双抗性的基因的构建方法，解决现有提高马铃薯对两种病毒的双抗性的方法存在的多种问题，包括以下步骤，  将PVX外壳蛋白基因全序列cp上的保守基因片段与具有相同酶切位点的PVY复制酶基因全序列NIb上的保守基因片段连接起来构成人工融合基因cn；将人工融合基因cn以正向和反向分别连接到内含子两侧，构建成人工融合基因的反向重复序列，人工融合基因cn的反向重复序列两端分别连有启动子和终止子。该融合基因的反向重复序列导入马铃薯后，其对两种病毒的双抗株率高，且抗性能达到高抗，甚至免疫水平，较易在生产上应用。

主权项

一种提高马铃薯对X病毒和Y病毒的双抗性基因的构建方法，其特征是包括以下步骤，(1)分别从感染PVX病毒和PVY病毒的植物体内经提取总RNA、RT‑PCR扩增以及基因克隆工序得到PVX外壳蛋白基因全序列cp和PVY复制酶基因全序列NIb；(2)利用PCR扩增分别得到PVX外壳蛋白基因全序列cp和PVY复制酶基因全序列NIb上的一段保守基因片段，保守基因片段位于PVX外壳蛋白基因全序列cp的第126‑642个核苷酸处和PVY复制酶基因全序列NIb的第587‑1132个核苷酸处；(3)酶切PCR扩增得到的PVX外壳蛋白基因全序列cp的保守基因片段，与具有相同酶切位点的PVY复制酶基因全序列NIb上的一段保守基因片段连接起来以构成人工融合基因cn；(4)将人工融合基因cn以正向和反向分别连接到pdk内含子的两侧，构建成一个人工融合基因的反向重复序列，该序列即为提高马铃薯对X病毒和Y病毒的双抗性基因RNAiCN；(5)人工融合基因cn的反向重复序列两端分别连有启动子和终止子。