可溶性淀粉共振散射光谱法检测α-淀粉酶活力的方法

摘要

本发明公开了可溶性淀粉共振散射光谱法检测α-淀粉酶活力的方法，它是利用已知酶活力的α-淀粉酶的共振散射强度I423nm和试剂空白的共振散射强度I0，求出ΔI423nm＝I0-I423nm做标准曲线，然后测定未知浓度的α-淀粉酶的ΔI，依据工作曲线求得被测物的α-淀粉酶的浓度，本发明的优点是：设备简单、操作方便，只需要荧光分光光度计即可完成；试剂易得，成本低廉；底物可溶性淀粉无毒。

主权项

可溶性淀粉共振散射光谱法检测α‑淀粉酶活力的方法，其特征是：测定方法包括如下步骤：1)制备已知α‑淀粉酶活力的测试体系：(1)在5mL具塞刻度试管中，分别加入0.65ml 10mg/mL可溶性淀粉和pH 5.3Na2HPO4‑KH2PO4溶液，然后再加入0.10mL 0.2％CaAc2溶液和0.1ml 0.9％NaCl溶液，将试管置水浴锅中，50℃预热，放置5min；(2)然后再加入5‑300μL浓度为5μg/mLα‑淀粉酶溶液，摇均时开始计时，放回50℃水浴锅中温浴，放置85min；(3)然后再依次加入0.40mol/L 0.2ml NaOH溶液，用二次蒸馏水定容至3ml，摇匀；(4)用荧光光度计同步扫描得到体系的共振散射光谱，淀粉微粒在264nm和423nm处有两个较宽的散射峰，在423nm处测定体系的共振散射强度I423nm；2)制备试剂空白体系：用步骤1)的方法制备试剂空白体系，但不加入α‑淀粉酶溶液，用荧光分光光度计测得试剂空白体系共振散射强度I0；3)计算ΔI423nm＝I0‑I423nm的值；4)以步骤1)中加入的α‑淀粉酶的最终浓度为横坐标，以ΔI423nm为纵坐标，绘制工作曲线；5)依据步骤1)的方法，制备检测体系，加入的α‑淀粉酶为未知浓度的检测样品，求得被测样品的ΔI423nm；6)根据工作曲线，求得被测样品中α‑淀粉酶的浓度。