直投式干酪乳杆菌鼠李糖亚种冻干粉的制备方法

摘要

本发明公开了一种直投式干酪乳杆菌鼠李糖亚种冻干粉及其制备方法。该方法将干酪乳杆菌鼠李糖亚种经过“两步法”扩大培养，尽量使细胞处于同步生长时期，然后在生产培养基中，用NaOH溶液在线控制pH为6.0～6.8，于35℃～37℃培养16h～24h，离心后收集菌泥，加入保护剂溶液，于-40℃～-65℃下预冻0.5h～2.0h，使其在容器壁上厚度为5～15mm，干燥制成直投式冻干粉。该冻干粉的活菌数达1011～1012cfu/g，并具有复水性好、色泽好、流动性好、易于贮运、方便生产等特点。用该冻干粉可直接用于发酵生产酱腌菜、香肠、酸奶、L-乳酸、玉米粉、豆粕、花生粕和用作益生菌制剂等。

主权项

一种直投式干酪乳杆菌鼠李糖亚种冻干粉的制备方法，其特征在于包括如下步骤和工艺条件：第一步将干酪乳杆菌鼠李糖亚种的冻干粉置于MRS培养基中，于28～30℃静止培养24h～36h，制成母发酵剂；以重量份数计，所述MRS培养基配方为：蛋白胨0.8～1.0份，酵母抽提物0.5～0.7份，葡萄糖1.5～2.0份，柠檬酸二铵0.1～0.2份，硫酸镁0.048～0.058份，牛肉膏0.5～1.0份，磷酸氢二钾0.1～0.2份，硫酸锰0.015～0.025份，乙酸钠0.4～0.5份，吐温800.1～0.3份，蒸馏水94.0～96.0份；搅拌溶解均匀后用0.08～0.10MPa灭菌15～20min，冷却至28～30℃备用；所述的干酪乳杆菌鼠李糖亚种保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号为CICC 6013，命名为Lactobacillus casei subsp.rhamnosus 6013；第二步以体积比为2～5∶100的比例，将母发酵剂接入工作发酵剂培养基中，于28～30℃静止培养24h～36h，制成工作发酵剂；以重量份数计，所述工作发酵剂培养基配方为：蛋白胨0.8～1.0份，酵母抽提物0.5～0.7份，葡萄糖1.5～2.0份，柠檬酸二铵0.1～0.2份，硫酸镁0.048～0.058份，牛肉膏0.5～1.0份，磷酸氢二钾0.1～0.2份，硫酸锰0.015～0.025份，乙酸钠0.4～0.5份，吐温800.1～0.3份，番茄汁6.0～8.0份，胡萝卜汁4.5～6.0份，抗坏血酸0.02～0.04份和蒸馏水79.8～85.4份；搅拌溶解均匀后用0.08～0.10MPa灭菌15～20min，冷却至28～30℃备用；第三步以体积比为2～5∶100的比例，将工作发酵剂接入生产培养基中，于35～37℃下的发酵罐中进行培养，在培养过程用NaOH溶液调整pH为6.0～6.8，搅拌转速为100～150rpm，培养16～24h后收集，得发酵菌悬液；以重量份数计，所述生产培养基配方组成为：蛋白胨2.5～3.0份，酵母抽提物0.5～0.7份，葡萄糖1.5～2.0份，柠檬酸二铵0.1～0.2份，硫酸镁0.048～0.058份，牛肉膏0.5～1.0份，磷酸氢二钾0.1～0.2份，硫酸锰0.015～0.025份，乙酸钠0.4～0.5份，吐温800.1～0.3份，番茄汁6.0～8.0份，胡萝卜汁4.5～6.0份，抗坏血酸0.02～0.04份，蒸馏水78.0～83.7份；搅拌溶解均匀后用0.08～0.10MPa灭菌15～20min，冷却至35～37℃备用；第四步将发酵菌悬液于5000～8000rpm，离心20～25min，舍弃上清液，收集菌泥；第五步在菌泥中，按复合保护剂溶液的生理盐水溶液与菌泥的体积比为3～5∶1加入复合保护剂溶液，混合均匀为保护剂悬浮液；以重量份数计，所述的复合保护剂溶液配方组成为：海藻糖5～10份，脱脂奶粉5～10份，氯化钠0.9份，蒸馏水79.1～89.1份，溶解后搅拌均匀，用0.08～0.10MPa灭菌15～20min，冷却至常温备用；第六步将保护剂悬浮液置于浅盘中，在于‑40℃～‑65℃下预冻0.5h～2.0h，使保护剂悬浮液厚度为5～15mm；第七步将第六步所得的保护剂悬浮液置于真空冷冻干燥机中，于冷阱温度为‑40℃～‑65℃，真空度为1.3～13.0Pa，干燥18～20h，得冻干粉，冻干粉水分重量含量低于3％，活菌数达到1011～1012cfu/g；第八步用湿度为50～60％的恒湿空气将冻干粉的温度恢复到常温，在湿度为50～60％的环境中，用气流包装机进行铝塑包装，气流分装机所用的无菌干燥空气的湿度不应高于20％。