海产贝类中病毒的浓缩方法及病毒浓缩回收率的测定方法

摘要

本发明提供一种海产贝类中病毒的浓缩方法及病毒浓缩回收率的测定方法。其方法包括组织匀浆、差速离心、氯仿去除脂蛋白。以甲型肝炎病毒为实施例，采用荧光定量PCR方法进行病毒回收率的测定，回收率达62.7％。该方法可用于贝类中病毒的直接浓缩，以利于开展海产贝类食用安全监测与评价。

主权项

一种海产贝类中病毒的浓缩方法，该方法包括：取25g贝肉组织于匀浆器中快速匀浆，将匀浆液放入50mL的灭菌离心管中并加入等体积的甘氨酸缓冲液(pH9.0)；调整pH至7.2±0.4，室温条件下震荡30min左右，4℃条件下，5,000×g离心15min，取上清液；上清液于4℃条件下，10,000×g离心1h，再次收集上清液；上清液在超速离心机中140,000×g离心1.5h，弃上清；沉淀用1mL PBS(pH7.4)重悬，以溶解沉淀；将重悬液加入一个2mL的灭菌离心管中并加入等量体积的氯仿，震荡30min，然后4,000×g离心30min；吸取上清液，上层液相即为病毒抽提样，得到约500μL浓缩样品，冻存备检。