一种外源基因在球虫类原虫——隐孢子虫体内表达的转染系统

摘要

本发明提供了一种以球虫类原虫——隐孢子虫病毒为转染载体和以DNA为转染载体的转染系统。利用隐孢子虫病毒RNA或含隐孢子虫的基因启动子的DNA作转染载体，在隐孢子虫体内进行外源基因的表达。包括用以隐孢子虫病毒RNA为载体和以DNA为载体的转染系统。球虫类原虫——隐孢子虫病毒基因组小、稳定、感染率高，每个细胞可达5×103，而且隐孢子虫为真核生物，外源基因在隐孢子虫体内表达出的蛋白具有活性。该转染系统含有多克隆位点，为通用型转染载体，多种外源基因可在隐孢子虫体内表达，为研究球虫类原虫的分子生物学和细胞生物学提供了转染系统。

主权项

一种以隐孢子虫病毒RNA为载体的转染系统，其特征在于：分别将含外源基因和多克隆酶切位点的基因片段替换隐孢子虫L‑dsRNA的489bp‑1235bp或S‑dsRNA的459bp‑1082bp，并分别在5’端前加入T7启动子，后用RNA聚合酶进行体外转录，后将其转录体电穿孔至隐孢子虫子孢子或卵囊体内进行外源基因的表达。