主权项 |
一种采用西瓜子叶节为外植体直接进行西瓜植株再生的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)无菌苗的培育。挑选成熟饱满的西瓜种子,用1%H2O2浸泡7‑8h后,去除种皮,先75%的酒精消毒60s,用无菌水冲洗2‑3次,再用15%NaClO消毒15min,无菌水冲洗4‑5次,接到萌发培养基上,萌发培养基为0.8%琼脂。接种后,置于28±2℃连续黑暗条件下培养3d,再置于培养温度为26±2℃,16hr、3000Lux光照条件下培养2‑3d。(2)子叶节的获得。播种后5‑6d,当无菌苗子叶由黄转呈浅绿色时,在生长点下3‑4mm处切去下胚轴,纵向切开胚轴,刮除顶芽、然后切除2/3子叶,获得西瓜子叶节。(3)不定芽的诱导。将子叶节接种于不定芽诱导培养基Ms5上,在温度为26±2℃,16hr、3000Lux光照条件下培养14d后可出现不定芽。不定芽出现后,再经过20‑25d的培养,即可获得0.5‑1.0cm不定芽。每2周更换一次培养基。所述的诱导培养基Ms5是按照每升MS基本培养基加入30g蔗糖、8g琼脂、5.0mgAgNO3、1.0mg 6‑BA和0.1mg IBA配制而成,并用0.1M的KOH溶液将pH调整为5.8。(4)不定芽的伸长将0.5‑1cm不定芽移入伸长培养基中继续培养。经过25‑30d培养后,不定芽可长到3‑4cm。每2周更换一次培养基。所述的伸长培养基是按照每升MS基本培养基加入30g蔗糖、8g琼脂、0.2mg KT配制而成,并用0.1M的KOH溶液将pH调整为5.8。(5)生根培养。将3‑4cm的不定芽移入生根培养基中。培养10‑14d即可生根。所述的生根培养基是按照每升MS基本培养基加入30g蔗糖、8g琼脂和0.5mg NAA配制而成,并用0.1M的KOH溶液将pH调整为5.8。(6)再生植株的驯化。当再生植株根长至2cm左右时,揭去封口膜,进行驯化,2的后,用镊子将生根苗取出,移栽于灭菌的营养土中,并用透明的塑料薄膜覆盖保湿,放在培养室中。 |