雁阵式定域随机突变方法及其在单抗分子进化技术中的应用

摘要

本发明公开了一种雁阵式定域随机突变方法及其在单抗分子进化技术中的应用，本发明的雁阵式定域随机突变方法，包括下列步骤：设计随机突变PCR扩增的目的序列的雁阵式引物，合成引物并将引物混合后进行overlapping PCR，获得指定区域发生随机突变的扩增序列。本发明的雁阵式定域随机突变方法可用于单克隆抗体分子进化，本发明还进一步结合KA扫描、雁阵式定域随机突变方法及噬菌体展示技术，提供了一种单克隆抗体分子进化的方法。本发明的突变方法用于分子进化，速度快、成功率高、应用范围广。

主权项

一种雁阵式定域随机突变方法，包括下列步骤：1)引物的设计与合成：(1)雁阵式引物设计：将指定发生随机突变区域及其侧翼序列作为随机突变PCR扩增的目的序列，并设计该目的序列的中央引物、左侧引物及右侧引物：中央引物的设计：以目的序列等分处为中心点，两侧各取多个碱基作为中央引物，中央引物至多包含一个突变位点；左侧引物及右侧引物的设计：设计目的序列中心点以左的重叠延伸PCR引物作为左侧引物，设计目的基因中心点以右的重叠延伸PCR引物作为右侧引物，各左侧引物与右侧引物均至多包含一个突变位点；(2)引物合成：中央引物取正向或反向，左侧引物均取正向，右侧引物均取反向；2)随机突变PCR：将步骤1)合成的左侧引物、右侧引物及中央引物混合进行overlapping PCR，获得指定区域发生随机突变的扩增序列。