一种促甲状腺素受体的提取及纯化方法

摘要

本发明公开了一种促甲状腺素受体的提取及纯化方法，提取方法为：(1)将去除脂肪和结缔的猪甲状腺组织，加A缓冲液，用匀浆器研磨；(2)离心；(3)取上清液，离心，弃上清液，向沉淀中加入B缓冲液，摇匀后离心，弃去上清液；(4)向沉淀中加入C缓冲液，提取，然后摇匀，离心，弃去沉淀，得到促甲状腺素受体粗品溶液，冻存备用；本发明提取和纯化TRAb检测中最为关键的组分TSH受体，并对提取和纯化的技术工艺进行了较大的调整和改进，能很好地保持猪TSH受体的生物学活性。本提取及纯化方法产率高，克服了以往TSH受体只能粗提而不易获得纯品及活性较低的困难。

主权项

一种促甲状腺素受体的提取方法，其特征是包括如下步骤：(1)将去除脂肪和结缔的猪甲状腺组织100～200g，加300～600ml 2‑8℃A缓冲液，用匀浆器研磨3～10min；(2)1000～2000r/min离心20～40min；(3)取上清液，在2～8℃下8000～18000r/min离心0.5～1.0小时，弃去上清液，向沉淀中加入100～200ml B缓冲液，摇匀后2～8℃下50,000～100,000g离心0.5～1.5小时，弃去上清液；(4)向沉淀中加入100～200ml C缓冲液，2‑8℃下提取1～2小时，然后摇匀，在2‑8℃下50,000～100,000g离心0.5～1.5小时，弃去沉淀，得到促甲状腺素受体粗品溶液，冻存备用；所述A缓冲液由下述组份组成：0.2～0.4M蔗糖；pH＝7.5的0.05～0.1M三羟甲基氨基甲烷‑盐酸；100～150mM氯化钠；1.0～2mM乙二胺四乙酸；0.5～1.0ug/ml亮抑酶肽；0.5～1.0ug/ml抑肽素；0.6～1.2ug/ml抑肽酶；0.1～0.2mM苯甲基磺酰氟；余量为水；所述B缓冲液由下述组份组成：pH＝7.5的10～20mM 4‑羟乙基哌嗪乙磺酸；质量浓度为1～2％的甘油；质量浓度为0.1～0.2％的烷基聚氧化乙烯或聚乙二醇辛基苯基醚；1.0～2mM乙二胺四乙酸；0.5～1.0ug/ml亮抑酶肽；0.5～1.0ug/ml抑肽素；0.6～1.2ug/ml抑肽酶；0.1～0.2mM苯甲基磺酰氟；余量为水；所述C缓冲液由下述组份组成：pH＝7.5的10～20mM 4‑羟乙基哌嗪乙磺酸；质量浓度为1～2％的甘油；质量浓度为0.5～1.5％的烷基聚氧化乙烯或聚乙二醇辛基苯基醚；质量浓度为0.5～1.5％的正‑辛基‑β‑D‑葡萄糖；1～2mM乙二胺四乙酸；0.5～1.0ug/ml亮抑酶肽；0.5～1.0ug/ml抑肽素；0.6～1.2ug/ml抑肽酶；0.1～0.2mM苯甲基磺酰氟，余量为水。