一种石油烃降解菌的高密度发酵方法

摘要

本发明公开了属于生物发酵技术领域的一种石油烃降解菌的高密度发酵方法。该方法是利用高密度发酵生产石油烃降解菌的方法，经过斜面菌种活化、扩大培养制备种子液、接种前准备及接种、分批补料发酵培养，调控菌体平均生长速率，以高密度发酵生产石油烃降解菌。该方法成本低，操作简单，能在短时间产生大量石油烃降解菌，解决了大规模石油污染土壤治理和石油污染突然事故的治理的菌种问题。

主权项

1.一种石油烃降解菌的高密度发酵方法，该方法是利用高密度发酵生产石油烃降解菌的方法，经过斜面菌种活化、扩大培养制备种子液、接种前准备及接种、分批补料发酵培养，调控菌体平均生长速率，以高密度发酵生产石油烃降解菌；其中石油烃降解菌为阴沟肠杆菌(Enterobacte cloacae)；该制备方法包括如下工艺步骤：(1)将斜面菌种经平板LB培养基培养活化、制备发酵种子液；(2)将步骤(1)中制备的种子液按发酵培养基体积的5-6％的比例接种于发酵培养基进行发酵，包括发酵前准备和接种，其中分批发酵培养基和补料发酵培养基包括以g/L计的如下组分：分批发酵培养基和补料发酵培养基组分培养温度为32～37℃，将菌体平均生长速率控制在0.2-0.4h^-1；发酵过程中pH值控制在6.8，并进行补料，控制补料速率与菌体的消耗速率相当，发酵完毕，收集发酵液，加甘油保存；发酵周期为12-14小时；其中微量元素由下列成分组成：H₃BO₃ 2.85g/L，MnSO₄·H₂O 1.55g/L，FeSO₄·7H₂O 1.362g/L，酒石酸钾钠1.77g/L，CuCl₂·2H₂O 0.0265g/L，ZnSO₄·7H₂O0.044g/L，CoCl₄·6H₂O 0.0405g/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.0251g/L；(3)采用分批-补料培养方式，对补料前pH、溶氧控制；(4)补料阶段：①流加葡萄糖溶液：在发酵过程中，C源耗尽时，即溶氧水平DO徒然上升，pH徒然上升，流加葡萄糖溶液，给发酵罐中补入浓度为1000g/L的葡萄糖溶液使得发酵罐内葡萄糖浓度控制在0.2-0.5g/L范围内；②流加含有发酵无机盐和微量元素的酵母溶液：N源耗尽时，即溶氧水平DO徒然上升，pH徒然下降，流加含有发酵无机盐和微量元素的酵母溶液。