一步层析法制备高纯度紫菜藻红蛋白

摘要

本发明涉及一步层析法制备高纯度紫菜藻红蛋白方法，属于海洋生物功能成分制备技术。紫菜经50倍体积的PBS(1mM，pH6.8)缓冲液溶胀，捣碎，再用800瓦超声波进行细胞破碎800秒，得到粗提物，用饱和度45％硫酸铵沉淀，再经0.1um膜微滤、10kDa膜超滤及饱和度20％的硫酸铵反相沉淀，在4℃用饱和度65％的硫酸铵沉淀结晶，一周后，过DEAE cellulose-52阴离子交换层析柱，用不同浓度NaCl的PBS(1mM，pH6.8)缓冲液梯度洗脱，分离纯化得到紫菜藻红蛋白。纯度(A562nm/A280nm)达到5.24，符合试剂级要求。

主权项

一步层析制备高纯度紫菜藻红蛋白的方法，其特征在于：(1)紫菜经50倍体积的1mM PBS pH6.8缓冲液溶胀，组织捣碎，再用800瓦功率超声波作用800秒进行细胞破碎，得到藻红蛋白的粗提物，用饱和度为45％的硫酸铵沉淀；(2)将沉淀用1mM PBS pH6.8缓冲液溶解，经0.1μm微滤膜微滤、10kDa超滤膜超滤后，透析，用饱和度为20％的硫酸铵进行反相沉淀，离心，对上清液进行透析，用饱和度为65％的硫酸铵沉淀结晶，在4℃条件下存放一周；(3)将晶体用1mM PBS pH6.8缓冲液溶解，透析，过DEAE cellulose‑52阴离子交换层析柱，用含离子强度为0.1～0.6MNaCl的1mM PBS pH6.8缓冲液梯度洗脱，分步收集洗脱液，即为获得的紫菜藻红蛋白。