燕窝全基因组DNA的提取方法

摘要

本发明提供了一种从燕窝中提取基因组DNA的方法，该方法是：首先利用SDS和DTT使燕窝中细胞裂解，在裂解的同时用高浓度的NaCl除去大部分糖蛋白，可减少纯化时糖蛋白对DNA的干扰，接着用氯仿异戊醇结合CTAB进一步除去糖蛋白，最后用异丙醇在低温下短时间使DNA沉淀，可最大限度减少糖蛋白和DNA共沉淀。本发明方法结果稳定，重现性好，且操作简单、费用低、无需特殊试剂和仪器，所得基因组DNA质量较好，能满足PCR反应的要求，可燕窝品种的鉴定。

主权项

燕窝全基因组DNA的提取方法，该方法由以下步骤组成：(1)取燕窝干品研磨成120目细粉，按重量体积比为1∶10加入SDS缓冲液，于65℃水浴2小时，高速离心；(2)取上清，加入等体积的氯仿异戊醇混合液，混合均匀，高速离心；(3)取上清，在室温下加入十分之一体积的CTAB缓冲液，混合均匀后室温下放置15min，然后加入等体积的氯仿异戊醇混合液，混匀，高速离心；(4)取上清，加入0.6～0.8体积倍预冷的异丙醇，混匀后立即高速离心；(5)取沉淀物用75～80％乙醇洗涤后将乙醇吹干，溶于TE溶液，即可；上述步骤中，所述的SDS缓冲液是Tris‑HCl、EDTA、SDS、DTT、蛋白酶k和NaCl的混合水溶液，其中Tris‑HCl的浓度为30～100mM，EDTA的浓度为8～30mM，SDS的浓度为5～20g/L，DTT的浓度为0.04M，蛋白酶k的浓度为100～300mg/L，NaCl的浓度为0.7～2.0M；所述的CTAB缓冲液是CTAB和NaCl的混合水溶液，其中CTAB的浓度为50～150g/L，NaCl的浓度为0.7M。