一种循环利用重组酿酒酵母生产低聚半乳糖的方法

摘要

本发明涉及一种利用重组酿酒酵母生产低聚半乳糖的方法，尤其涉及一种表面展示β-半乳糖苷酶的重组酿酒酵母及其制备方法以及循环利用该重组酿酒酵母发酵乳糖生产低聚半乳糖的方法。首先构建β-半乳糖苷酶酵母表面展示载体，将β-半乳糖苷酶展示在酿酒酵母细胞表面，然后循环利用该重组酵母发酵乳糖生产低聚半乳糖。本发明所述的表面展示β-半乳糖苷酶的重组酿酒酵母可被循环利用生产低聚半乳糖，且产量高，生产成本低，工艺简单，具有广阔的工业化应用前景。

主权项

一种利用表面展示β‑半乳糖苷酶的重组酿酒酵母细胞生产低聚半乳糖的应用，其特征在于，所述的重组酿酒酵母细胞为含有插入了扩张青霉CGMCC No.2352中的β‑半乳糖苷酶基因序列的质粒载体；步骤如下：先将表面展示β‑半乳糖苷酶的重组酿酒酵母悬于YNB‑CAA‑乳糖培养液，调OD600为8.0～10.0，25℃培养4～6天；然后3000转/分离心3～5分钟，对离心后所得的上清液通过高效液相色谱分析其低聚半乳糖含量；将离心后所得的重组酵母细胞，重悬于新的YNB‑CAA‑乳糖培养液，按上述方法循环发酵乳糖生产低聚半乳糖，并分析每个循环所得上清液的低聚半乳糖含量；所述YNB‑CAA‑乳糖培养液成分为：无氨基酸酵母氮源6.7g/L，酪蛋白水解物5g/L，乳糖100g/L，pH自然，115℃灭菌30分钟。