链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法

摘要

本发明公开了一种链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法，通过应用藻胆蛋白beta裂合酶催化藻红胆素与链霉亲和素标记的藻蓝蛋白类脱辅基蛋白共价结合，制备链霉亲和素标记的结合PEB的藻蓝蛋白类荧光蛋白质。本发明的方法应用生物过程生产藻蓝蛋白类荧光蛋白质，是一种环境友好的生产方法。藻蓝蛋白类荧光蛋白质能应用于食品、保健与医药功能材料领域，特别是应用为生物和医学分子监测领域的荧光探针。

主权项

一种链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法，其特征在于包括下述步骤：(1)用基因工程方法，将beta裂合酶基因克隆于pETDuet‑1载体中，得到beta裂合酶表达质粒；(2)用基因工程方法，将藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因与链霉亲和素基因拼接后克隆于pET30载体中，得到链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒；(3)用基因工程方法将藻红胆素生物合成酶基因ho1和pebB克隆于pCDFDuet‑1载体中，得到ho1和pebB表达质粒；(4)用基因工程方法将藻红胆素生物合成酶基因pebA克隆于pACYCDuet‑1载体中，得到pebA表达质粒；(5)将beta裂合酶表达质粒、链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒、ho1和pebB表达质粒及pebA表达质粒依次转入配套的宿主菌，当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌通过发酵工程生产链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质；发酵后，按常规蛋白质提纯技术，提纯得到相应的链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质；以上各步骤中所述的宿主菌为大肠杆菌，所述的beta裂合酶基因是指Anabaena sp.PCC7120中alr0617基因，所述的藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因是指Anabaena sp.PCC7120或M.laminosus sp.PCC7603中cpcB基因，所述的藻红胆素生物合成酶基因ho1是指Anabaena sp.PCC7120中的ho1基因，所述的藻红胆素生物合成酶基因pebA和pebB分别是指Calothrix sp.PCC7601中pebA和pebB基因。