一种黑曲霉产木聚糖酶方法

摘要

本发明提供了一种新的木聚糖酶生产方法，其步骤包括：配置营养盐液、配置液体种子培养基，将产孢子培养基上的黑曲霉按2％接种量接种于种子培养基，培养3-4天。然后配置液体发酵培养基(玉米芯2％，(NH4)2SO4 1％，KH2PO40.13％，CaCl2 0.025％，MgSO4·7H2O 0.05％，FeSO4·7H2O 0.008％，ZnSO4·7H2O 0.003％)。将种子培养基菌种按25％的接种量接种于液体发酵培养基，再加入2％的麸皮、1％的酵母膏、0.5％的吐温，调节pH为5.0，温度28℃，于150r/min放于恒温振荡培养箱中培养72h。所得发酵液4000r/min离心分离10min，过滤得上清液，即为粗酶液，经(NH4)2SO4分级沉淀纯化后，再经2次葡聚糖凝胶柱层析。最后干燥后得木聚糖酶粉末。本发明提供了一种新的木聚糖酶生产方法，利用该法生产木聚糖酶生产工艺简单，操作方便，原料易得，生产成本低，无污染，适于大规模工业化生产。

主权项

一种黑曲霉产木聚糖酶方法，其特征包括以下几个步骤：(1)配制营养盐液取1000ml烧杯加入14g(NH4)SO4，20g KH2PO4，4g CaCl2·2H2O，1.5gMgSO4搅拌均匀，放于4℃冰箱中保藏。(2)黑曲霉菌种保藏黑曲霉X‑1接种在马铃薯、葡萄糖、琼脂的试管斜面上，在30℃恒温箱中培养7天后，于冰箱内4℃以下保藏。(3)黑曲霉的选育及培养将菌种保藏培养基上的黑曲霉菌接种到产孢子培养基上，于28℃下放入恒温培养箱中培养4‑5d。(4)黑曲霉种子培养基配置取葡萄糖30g，玉米浆10g，营养盐100g，配置1000ml营养液。(5)黑曲霉接种培养将产孢子培养基上的菌种按2％的接种量接种于种子培养基，30℃、180r/min放于恒温振荡培养箱中培养3‑4天。(6)产酶基础培养基制备配置液体发酵培养基：加入玉米芯2％，(NH4)2SO4 1％，KH2PO4 0.13％，CaCl20.025％，MgSO4·7H2O 0.05％，FeSO4·7H2O 0.008％，ZnSO4·7H2O 0.003％。(7)接种发酵培养将种子培养基菌种按25％的接种量接种于液体发酵培养基，再加入2％的麸皮、1％的酵母膏、0.5％的吐温，调节PH为5.0，温度28℃，于150r/min放于恒温振荡培养箱中培养72h。(8)盐析分离将发酵液4000r/min离心分离10min，过滤得上清液，即为粗酶液，粗酶液经20％饱和硫酸铵沉淀，纯化倍数为3.0倍。追加硫酸铵饱和度至60％，纯化倍数为5.9倍.在4℃静至12h后，取上清液。(9)凝胶过滤提取木聚糖酶经硫酸铵分级沉淀后的酶样经SephadexG‑25葡聚糖凝胶柱层析，再经SephadexG‑100葡聚糖凝胶柱层析，干燥后得木聚糖酶粉末。