含阳离子氨基酸多肽修饰的纳米磷酸钙基因载体的制备方法

摘要

本发明公开了一种含阳离子氨基酸多肽修饰的纳米磷酸钙基因载体的制备方法，包括以下步骤：（1）配制CaCl2水溶液，经过滤灭菌后室温下储存；（2）配制2×HBS水溶液，用NaOH溶液调节pH值，经过滤灭菌后室温下储存；（3）配制含阳离子氨基酸多肽水溶液，调pH值，过滤灭菌后储存；（4）将2×HBS和含阳离子氨基酸多肽溶液按1：0~1：3的体积比混合得到溶液a，再将pEGFP-C1质粒与CaCl2共孵育后，在旋涡震荡条件下将其以大约每秒1滴的速度滴入所述溶液a中,使质粒浓度达20~40μg/mL，放置15~25分钟后得到含阳离子氨基酸多肽改性磷酸钙（CP-CaP）。用本发明方法制备的含阳离子氨基酸多肽修饰的纳米磷酸钙基因载体尺寸稳定、转染效率高。

主权项

一种含阳离子氨基酸多肽修饰的纳米磷酸钙基因载体的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：（1）配制150 ~350 mM的CaCl2水溶液，经过滤灭菌后室温下储存；（2）配制2×HBS水溶液，其中含120~160 mM NaCl，1.2~1.6 mM Na2HPO4和30~70 mM HEPES，室温下用NaOH溶液调节到pH 7.00~7.20，经过滤灭菌后室温下储存；（3）配制10~30 mM浓度的含阳离子氨基酸多肽水溶液，调pH值到7.00~7.20，过滤灭菌后0~4 oC储存；（4）将2×HBS和含阳离子氨基酸多肽溶液按1：0~1：3的体积比混合得到溶液a，再将pEGFP‑C1质粒与CaCl2共孵育5~9分钟后，在旋涡震荡条件下将其以大约每秒1滴的速度滴入所述溶液a中,使质粒浓度达20~40 ug/mL，放置15~25分钟后得到含阳离子氨基酸多肽改性磷酸钙CP‑CaP。