一种高活性可溶型血管生长抑制剂Kringle 5三聚体的高效表达方法

摘要

一种高活性可溶型血管生长抑制剂Kringle 5三聚体的高效表达方法，方法包括：1)制备Kringle 5基因的上、下游引物、pET15b质粒DNA以及感受态细胞BL21(DE3)plys；2)对Kringle 5基因进行PCR扩增，获取PCR扩增产物；3)分别PCR扩增产物以及pET15b质粒进行双酶切；4)利用T4DNA连接酶对PCR扩增产物经酶切后的产物以及pET15b质粒经酶切后的产物进行酶连接，得到重组质粒pET15b/K5；5)将重组质粒pET15b/K5转化至感受态细胞BL21(DE3)plys中培养并进行保存；6)对重组质粒进行低温诱导表达。本发明提供了一种高活性可溶型血管生长抑制剂Kringle 5三聚体的高效表达方法。

主权项

一种高活性血管生长抑制剂Kringle 5三聚体的高效表达方法，其特征在于：所述高活性血管生长抑制剂Kringle 5三聚体的高效表达方法包括以下步骤：1)制备Kringle 5基因的上游引物、Kringle 5基因的下游引物、pET15b质粒DNA以及感受态细胞BL21(DE3)plys；所述Kringle 5基因的上游引物含有Nco I酶切位点；所述Kringle 5基因的下游引物含有Xho I酶切位点；2)根据步骤1)所得到的Kringle 5基因的上游引物以及Kringle 5基因的下游引物对Kringle 5基因进行PCR扩增，获取PCR扩增产物；3)利用限制性内切酶分别对pET15b质粒以及步骤2)所得到的PCR扩增产物进行双酶切，分别得到pET15b质粒经酶切后的产物以及PCR扩增产物经酶切后的产物；所述限制性内切酶是Nco I酶以及Xho I酶；4)利用T4DNA连接酶对步骤3)中所得到的PCR扩增产物经酶切后的产物以及pET15b质粒经酶切后的产物进行酶连接，得到重组质粒pET15b/K5；5)将步骤4)获取得到的重组质粒pET15b/K5转化至感受态细胞BL21(DE3)plys中培养并进行保存；6)对步骤5)中已经转化至感受态细胞BL21(DE3)plys中的重组质粒进行诱导表达。