一种利用原核表达系统高效制备蛋白质分子量标准的方法

摘要

本发明公开了一种利用原核表达系统高效制备蛋白质分子量标准的方法，包括以下步骤：(1)选择常用低分子量标准为起始蛋白质分子量标准A；(2)选择稀有密码子含量低或者无稀有密码子的基因序列为模板，并设计引物依次获取不同的目的片段，使目的序列与pET28a载体连接后编码区的分子量为(1)中所设定分子量，最适等电点在4-9之间；(3)将目的片段按照一定的酶切位点分别插入表达载体pET28a-(+)，筛选的阳性克隆分别转入大肠杆菌BL21_star(DE3)进行诱导表达；(4)对不同蛋白进行表达形式的鉴定；(5)分别用亲和层析纯化及包涵体纯化等方法纯化目的蛋白，即为蛋白质分子量标准。

主权项

一种利用原核表达系统制备蛋白质分子量标准的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)选择常用低分子量标准为起始蛋白质分子量标准A，中间蛋白分子量按A+15，A+30，A+45，A+60，A+75，终点蛋白按A+105分子量标准设定；(2)选择稀有密码子含量低或者无稀有密码子的基因序列为模板，通过Expasy tools软件分析截短基因编码蛋白质的序列特征，并设计引物依次获取不同的目的片段，使目的序列与pET28a载体连接后编码区的分子量为(1)中所设定分子量，最适等电点在4‑9之间；(3)将目的片段按照一定的酶切位点分别插入表达载体pET28a，筛选的阳性克隆分别转入大肠杆菌BL21_star(DE3)进行诱导表达；(4)将构建好的分别表达多个分子量的工程菌分别进行诱导时间和诱导剂终浓度的优化，并对不同蛋白进行表达形式的鉴定；(5)根据目标蛋白的表达形式的不同分别用亲和层析纯化及包涵体纯化等方法纯化目的蛋白，即为蛋白质分子量标准。