发明名称 |
一种病毒性疫苗大规模生产的纯化方法 |
摘要 |
本发明提供了病毒性疫苗大规模生产的纯化方法,利用疏水层析方法去除宿主细胞DNA和杂蛋白。疏水柱层析采用低吸附疏水层析介质进行纯化,主要是利用病毒在一定硫酸铵浓度下,充分暴露其疏水性,从而使其能够结合在层析柱上,而部分杂蛋白由于疏水性弱,残余宿主细胞DNA不具有疏水性,不能结合,所以流穿出来,这样就可以达到去除杂蛋白及宿主细胞DNA目的,其中杂蛋白去除率在90%以上,宿主细胞残余DNA含量达到500pg左右。本发明提供了一种创新性的病毒性疫苗纯化方法,该方法纯化效果好、重复性好、适宜于规模化疫苗制备。经疏水层析后宿主细胞残余DNA在500pg/ml左右,再辅以离子交换等纯化方法可以达到国家药典标准。 |
申请公布号 |
CN102018955A |
申请公布日期 |
2011.04.20 |
申请号 |
CN201010605535.3 |
申请日期 |
2010.12.27 |
申请人 |
吉林亚泰生物药业股份有限公司 |
发明人 |
于洪涛;李光谱;胡晓明;张莹;周庆玲;李淑兰;郭岩;岳振齐;董唤;董鹏 |
分类号 |
A61K39/12(2006.01)I;A61K39/145(2006.01)I;A61K39/205(2006.01)I;A61K39/29(2006.01)I;C07K1/20(2006.01)I;A61P31/14(2006.01)I;A61P31/16(2006.01)I |
主分类号 |
A61K39/12(2006.01)I |
代理机构 |
吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 |
代理人 |
陈宏伟 |
主权项 |
一种病毒性疫苗大规模生产的纯化方法,所述方法包括下面步骤:1)采用细胞培养技术收获的病毒抗原;2)取柱层析胶Phenyl Sepharose 6 Fast Flow(Low Sub),按与水例为4:1,充分搅拌后装填于层析柱中;3)用0.1‑1.0M NaOH溶液,冲洗层析柱,至液体流出为PH8~14,保存1‑24小时;4)用注射用水冲洗层析柱至中性为止;5)用10‑40%硫酸铵,0.01‑0.05MPB缓冲液平衡层析柱1‑4个体积;6)将疫苗稀释成含10‑40%硫酸铵的浓度,与平衡液硫酸铵浓度一致,上样;7)上样后继续用平衡液冲洗至基线;8)用PB缓冲液、注射用水或0.01‑0.2MTris‑HCL洗脱收集疫苗抗原;9)收集的洗脱峰样品用凝胶层析或超滤除盐,并进行相应指标测定。 |
地址 |
130033 吉林省长春市经济开发区仙台大街2686号 |