从淡水鱼鱼鳞中制备未变性胶原蛋白的方法

摘要

本发明属于农业天然产物提取领域，具体涉及从淡水鱼鳞中制备未变性胶原蛋白的方法，具体步骤为：1)将洗净的鱼鳞加入蒸馏水，用电动搅拌器间歇搅拌3-5分钟，蒸馏水洗至表面无色素和脂肪等附着；自然风干或低温干燥后粉碎至40-50目；2)将1)的材料按1∶10-1∶20加入为8-10％柠檬酸、苹果酸溶液，冰水浴微波处理2min，10-20℃脱钙8-24h，过滤，滤液置10℃以下静置5-10h，得柠檬酸钙沉淀；3)向经步骤2)处理后所得的脱钙鱼鳞中按1∶5至1∶20比例加入1％的苹果酸或柠檬酸溶液(含蛋白酶)于0-20℃搅提取2-4次，每次12-48h，离心，取上清，加NaCl至终浓度为0.7-0.90mol/L，盐析过夜，离心，沉淀用0.50mol/L乙酸溶解，重复盐析和溶解操作1次，将沉淀透析，冷冻干燥得本发明的产品。

主权项

从淡水鱼鳞中提取未变性胶原蛋白的方法，其步骤包括鱼鳞预处理、脱钙、胶原蛋白提取和分离，其特征在于以下步骤：(1)鱼鳞的预处理：将洗净的鱼鳞按重量/体积比为1∶10至1∶15加入洁净的自来水，采用电动搅拌器于20℃以下间歇搅拌，搅拌速度为2000r/min，搅拌时间为3‑5分钟，用蒸馏水将所述的鱼鳞洗至表面无色素和脂肪附着，自然风干或置于＜50℃温度下干燥，将所述的鱼鳞粉碎至40‑50目，得到预处理鱼鳞；(2)脱钙处理：将步骤(1)得到的预处理鱼鳞按重量/体积比为1∶10‑1∶20，加入浓度为8‑10％的柠檬酸或苹果酸溶液，冰水浴中用微波处理2min，所述的微波功率为200‑300W，然后于10℃下脱钙处理24h，过滤分离得到脱钙鱼鳞和滤液，将所得的滤液置10℃以下静置5‑10h，得到柠檬酸钙沉淀；(3)提取分离：向步骤(2)所得的脱钙鱼鳞按重量/体积比为1∶5至1∶20加入质量浓度为1％的含质量分数为0.5‑1％碱性蛋白酶的苹果酸或柠檬酸溶液，于0‑10℃下提取2‑4次，每次处理12‑48h，提取完毕后用纱布过滤，将得到的滤液置20℃以下5000‑50000g离心10‑20min，取上清液，加NaCl至其终浓度为0.7‑0.90mol/L，盐析过夜，5000‑50000g离心10‑30min，取沉淀，将所得的沉淀用0.50mol/L乙酸溶解，重复盐析1次，再将得到的沉淀用蒸馏水透析1‑3d，每天更换蒸馏水2‑3次，将透析液冷冻干燥，即得未变性的鱼鳞胶原蛋白。