一种链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法

摘要

本发明属于纳米材料技术领域，具体的说是涉及一种链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法。具体为通过PCR技术将Strep II标签基因分别连在APC的α和β亚基脱辅基蛋白基因的N末端，得到Strep II-apcA和Strep II-apcB基因片段；将Strep II-apcA基因片段插入到6×His基因的下游，与藻胆素生物合成酶基因共同克隆到一个表达载体中；将Strep II-apcB基因片段插入到6×His基因的下游，与色基裂合酶基因克隆到另一个载体上，将两个表达载体同时转化大肠杆菌，筛选工程菌，经蛋白分离纯化，将纯化后双标签重组APC荧光蛋白质与锌离子修饰的超顺磁性硅壳纳米颗粒振荡混合，即得到链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒。本发明所得双标签重组蛋白无需化学修饰，即可生物结合链酶亲和素。

主权项

一种链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法，其特征在于：1)通过PCR反应将Strep II标签基因分别连在别藻蓝蛋白APC的α和β亚基脱辅基蛋白基因的N末端，分别得到Strep II‑apcA和Strep II‑apcB基因片段，待用；2)将Strep II‑apcA基因片段插入到带有6×His基因的载体A中6×His基因的下游，同时将藻胆素生物合成酶基因hol和pcyA插入到载体上，得到pCDF‑Strep II‑apcA‑hol‑pcyA，待用；将Strep II‑apcB基因片段插入到带有6×His基因的载体B中6×His基因的下游，同时将色基裂合酶基因cpcS和cpcU插入到载体上，得到pRSF‑Strep II‑apcB‑cpcS‑cpcU，待用；3)将步骤2)所得两个表达载体同时转化大肠杆菌，筛选获得同时表达上述基因的工程菌；4)将上述工程菌诱导培养后分离纯化，得到双标签重组APC荧光蛋白质；5)将所得双标签重组APC荧光蛋白质与锌离子修饰的超顺磁性硅壳纳米颗粒振荡混合，即得到链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒。