基于环介导等温扩增技术的疟原虫属和种的核酸筛查方法

摘要

本发明公开了一套基于环介导等温扩增技术的疟原虫属和种的核酸筛查方法，属于生物检测领域。利用环介导等温扩增（LAMP）技术来进行，通过使用疟原虫属特异性引物和种特异性引物，利用LAMP技术平台扩增靶基因的特定区域，在阳性和阴性质控和内对照检测体系的辅助下，从分子水平对疟原虫属进行筛查或检测，并在此基础上，对该属生物中会使人类感染疟疾的四种疟原虫，包括恶性疟原虫（Plasmodiumfalciparum）、三日疟原虫（Plasmodiummalariae）、卵形疟原虫（Plasmodiumovale）及间日疟原虫（Plasmodiumvivax）进行疟原虫种筛查或检测。本发明的方法具有简便、经济、快速、灵敏和特异的特点，具有广阔的应用前景。

主权项

一种基于环介导等温扩增技术的疟原虫属和种的核酸筛查方法，利用环介导等温扩增（LAMP）技术进行，其特征在于，通过使用疟原虫属特异性引物和种特异性引物，利用LAMP技术平台扩增靶基因的特定区域，在阳性和阴性质控和内对照检测体系的辅助下，从分子水平对疟原虫属进行筛查或检测，并在此基础上，对该属生物中会使人类感染疟疾的四种疟原虫，包括恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）、三日疟原虫（Plasmodium malariae）、卵形疟原虫（Plasmodium ovale）及间日疟原虫（Plasmodium vivax）进行疟原虫种筛查或检测；所述的疟原虫属的LAMP检测特异性引物是：疟原虫属的LAMP反应引物序列组成引物类别序列组成F3前外引物5’‑ GTATCAATCGAGTTTCTGACC ‑3’B3后外引物5’‑ CTTGTCACTACCTCTCTTCT ‑3’FIP前内引物5’‑   TCGAACTCTAATTCCCCGTTACCTATCAGCTTTTGATGTTAGGGT ‑3’BIP后内引物5’‑ CGGAGAGGGAGCCTGAGAAATAGAATTGGGTAATTTACGCG   ‑3’所述的恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）检测引物是恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）的LAMP反应引物序列组成引物类别序列组成F3前外引物5’‑ TGTAATTGGAATGATAGGAATTTA ‑3’B3后外引物5’‑ GAAAACCTTATTTTGAACAAAGC ‑3’FIP前内引物5’‑ AGCTGGAATTACCGCGGCTG GGTTCCTAGAGAAACAATTGG   ‑3’BIP后内引物5’‑   TGTTGCAGTTAAAACGTTCGTAGCCCAAACCAGTTTAAATGAAAC ‑3’所述的三日疟原虫（Plasmodium malariae）LAMP检测引物是 三日疟原虫（Plasmodium malariae）的LAMP反应引物序列组成引物类别序列组成F3前外引物5’‑ CAAGGCCAAATTTTGGTT ‑3’B3后外引物5’‑ CGGTTATTCTTAACGTACA ‑3’FIP前内引物5’‑ TATTGGAGCTGGAATTACCGCGATGATGGGAATTTAAAACCT   ‑3’BIP后内引物5’‑   AATTGTTGCAGTTAAAACGCCTATGTTATAAATATACAAAGCATT ‑3’卵形疟原虫（Plasmodium ovale）LAMP检测引物是卵形疟原虫（Plasmodium ovale）的LAMP反应引物序列组成引物类别序列组成F3前外引物5’‑ GGAATGATGGGAATTTAAAACC ‑3’B3后外引物5’‑ GAATGCAAAGAACAGATACGT ‑3’FIP前内引物5’‑ TATTGGAGCTGGAATTACCGCGTTCCCAAAATTCAATTGGAGG   ‑3’BIP后内引物5’‑   GTTGCAGTTAAAACGCTCGTAGTGTATTGTCTAAGCATCTTATAGCA ‑3’间日疟原虫（Plasmodium vivax）LAMP检测引物是间日疟原虫（Plasmodium vivax）的LAMP反应引物序列组成引物类别序列组成F3前外引物5’‑ GGAATGATGGGAATTTAAAACCT ‑3’B3后外引物5’‑ ACGAAGTATCAGTTATGTGGAT ‑3’FIP前内引物5’‑ CTATTGGAGCTGGAATTACCGCTCCCAAAACTCAATTGGAGG   ‑3’BIP后内引物5’‑ AATTGTTGCAGTTAAAACGCTCGTAAGCTAGAAGCGTTGCT   ‑3’。