制备藻红蓝蛋白类荧光蛋白质的方法

摘要

本发明公开了一种制备藻红蓝蛋白类荧光蛋白质的方法，通过应用藻胆蛋白beta155裂合酶催化藻蓝胆素与藻红蓝蛋白类脱辅基蛋白共价结合，制备藻红蓝蛋白类荧光蛋白质。本发明的方法应用生物过程生产藻红蓝蛋白类荧光蛋白质，是一种环境友好的生产方法。藻红蓝蛋白类荧光蛋白质能应用于食品、保健与医药功能材料领域，特别是应用为生物和医学分子监测领域的荧光探针。

主权项

一种制备藻红蓝蛋白荧光蛋白质的方法，其特征在于包括下述步骤：(1)用基因工程方法，将Anabaena sp.PCC7120中的beta155裂合酶基因all5339和Anabaena sp.PCC7120或M.laminosus PCC7603中的藻红蓝蛋白脱辅基蛋白基因pecB克隆于pCDFDuet‑1中，得到beta155裂合酶和藻红蓝蛋白脱辅基蛋白表达质粒；(2)用基因工程方法将PCB生物合成酶基因hol和pcyA同时克隆于pACYCDuet‑1中，得到PCB生物合成酶质粒；(3)将beta155裂合酶和藻红蓝蛋白脱辅基蛋白表达质粒、PCB生物合成酶质粒依次转入配套的宿主菌，当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌发酵后，按常规蛋白质提纯技术，提纯得到相应的藻红蓝蛋白荧光蛋白质。