一种检测肺炎支原体耐药突变的方法

摘要

本发明属生物、医药领域，具体涉及一种检测肺炎支原体耐药突变的方法。本发明采用Real-time PCR及可分辨单碱基差异的cycling探针技术，通过在肺炎支原体23S rRNA基因2063位/2064位碱基上下游序列中寻找针对肺炎支原体的特异性引物，根据肺炎支原体无突变敏感株及突变耐药株23S rRNA基因2063位/2064位的碱基差异，分别设计针对无突变敏感株、2063位突变耐药株及2064位突变耐药株的特异性cycling探针；采用肺炎支原体特异性引物进行PCR扩增，通过Real-time PCR扩增仪实时读取荧光强度变化，确定被检样品中的序列的突变类型。本发明能正确区分肺炎支原体临床分离株无突变敏感株和突变耐药株，特异性为100％。敏感性可达102拷贝/PCR反应。

主权项

一种检测肺炎支原体耐药突变的方法，其特征在于，采用Real‑time PCR及可分辨单碱基差异的cycling探针技术，通过下述步骤：1)在肺炎支原体23S rRNA基因2063位/2064位碱基上下游序列中寻找针对肺炎支原体的特异性引物，引物序列为：上游引物5’‑CTGAAGCCCCAGTGAACGG‑3’下游引物5’‑ATTAGAACAGCACACAACCAAG‑3’；2)根据肺炎支原体无突变敏感株及突变耐药株23S rRNA基因2063位/2064位的碱基差异，分别设计针对无突变敏感株、2063位突变耐药株及2064位突变耐药株的特异性cycling探针；3)采用肺炎支原体特异性引物进行PCR扩增，通过Real‑time PCR扩增仪实时读取荧光强度变化，确定被检样品中的序列的突变类型。