肿瘤细胞中靶向性表达shRNA的真核表达载体

摘要

本发明提供了一种肿瘤细胞中靶向性表达shRNA的真核表达载体，包括如下结构：1)由polII型启动子驱动的、将荧光蛋白基因与mirshRNA结构串联在一起的表达框结构；2)经过CMV增强子和SV40增强子增强的hTERT启动子；3)以mir30为基础的mirshRNA结构：mir30左臂-shRNA-mir30右臂，此mirshRNA结构可多个串联；4)Kan或者Amp抗性筛选标记；5)LR同源重组臂。利用本发明提供的方法构建上述shRNA真核表达载体，能够在肿瘤细胞中靶向性、特异性地表达单条或多条shRNA，在对肿瘤细胞进行RNA干扰、实行基因治疗的同时，又不影响正常细胞，解决了利用RNA干扰进行基因治疗时的非特异性干扰难题，有助于RNA干扰在肿瘤的基因治疗方面的研究和应用。

主权项

肿瘤细胞中靶向性表达shRNA的真核表达载体，包括polII型启动子、荧光蛋白基因、mirshRNA结构和Poly A串联的表达框结构，其特征在于将polII型启动子、荧光蛋白基因、mirshRNA结构和PolyA串联的表达框结构构建至同一个载体上；所述polII型启动子为上游具有CMV增强子和SV40增强子的hTERT启动子；所述mirshRNA结构为：microRNA左臂+待表达的shRNA+microRNA右臂；所述荧光蛋白基因位于hTERT启动子下游、mirshRNA结构上游。