一种获取4型戊型肝炎病毒重组多肽的方法

摘要

本发明涉及获取4型戊型肝炎病毒重组多肽的方法。本发明采用Trizol抽提戊肝患者血清中的总RNA，利用RT-PCR技术分别扩增包含4型HEV ORF2的主要免疫表位多肽和截短多肽的基因片断，将扩增的基因片断插入表达载体pRSET-C，将该质粒转化BL21(DE3)plyss感受态细菌，在IPTG诱导下进行表达，采用Ni-NTA树脂层析纯化，最终获得高纯度的重组多肽。本发明解决了以往存在的血清中其他一些物质和主要免疫表位多肽发生非特异性结合，从而干扰以抗原抗体反应为基础的戊型肝炎ELISA检测方法的缺陷。本发明提供了一种成本低、简便易行的获取4型戊型肝炎病毒主要免疫表位多肽及其截短多肽的方法，具有良好的抗原性和免疫原性，可排除非特异性吸附对戊型肝炎检测的干扰。

主权项

一种获取4型戊型肝炎病毒重组多肽的方法，其步骤为(1)采用Trizol抽提戊型肝炎患者血清中的总RNA，再利用RT‑PCR技术分别扩增编码4型HEV ORF2的主要免疫表位多肽和截短多肽的基因片断；(2)将扩增的基因片断插入表达载体pRSET‑C；(3)再将该载体转化BL21(DE3)plysS感受态细菌，在IPTG诱导下进行表达；(4)采用Ni‑NTA树脂层析纯化，最终获得高纯度的重组多肽；其中，步骤(1)中所述的主要免疫表位多肽是SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的多肽，并且该多肽位于4型HEV ORF2的459‑607位氨基酸；步骤(1)中所述的截短多肽为在4型HEV ORF2主要免疫表位区域的氨基端和羧基端分别截短13个氨基酸残基后形成的重组多肽，并且该多肽位于4型HEV ORF2的472‑607位氨基酸或459‑594位氨基酸。