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一种笃斯越桔花青素的分离纯化方法，包括原料预处理、浸提浓缩、纯化浓缩的过程；其特征在于(1)所述的原料预处理过程，是将新鲜的笃斯越桔果实进行速冻处理得冷冻的笃斯越桔果实；或者在‑18℃～‑35℃环境下保藏备用；或者冻干至水分含量为5％以下，再粉碎至颗粒度为60～120目，制得笃斯越桔果实冻干粉，为下步浸提提供原料；(2)所述的浸提浓缩过程，是将笃斯越桔冷冻果实或冻干粉在酸化乙醇溶液中采用超声波、微波辅助冷浸提法分离获得笃斯越桔花青素浸提液，再经减压浓缩处理至花青素含量为1.5～4.0mg/mL；其中：①酸化乙醇溶液：乙醇与盐酸体积比：95∶5～70∶30，乙醇浓度50％～100％；②浸提料液：按重量比笃斯越桔果实冻干粉∶酸化乙醇＝1∶25～1∶150；或者冷冻的笃斯越桔果实研磨至均匀浆液后投料，按重量比笃斯越桔果实浆料：酸化乙醇＝9∶25～9∶150；③超声功率200～600W，超声时间5～30min；④微波功率在400～900W，微波时间4～10min；⑤浸提温度10℃～40℃，浸提次数1～4次，浸提总时间为1～8h；⑥减压浓缩：真空度为0.075～0.095Mpa，温度为45℃～60℃，浓缩至花青素含量为1.5～4.0mg/mL；(3)所述的纯化浓缩过程，是将笃斯越桔花青素浸提液浓缩液，采用柱层析AB‑8大孔树脂静态、动态相结合吸附纯化以获得笃斯越桔花青素洗脱液，再经减压浓缩处理至原体积的1/5～1/20；所述的纯化浓缩过程进一步包括：柱层析AB‑8大孔树脂的径高比为1∶10～30，单柱或双柱串联；静态吸附条件：柱层析上样量为1～15mL/min，操作温度在30℃～50℃，吸附pH值2～6；动态吸附条件：洗脱液乙醇浓度为20～80％；洗脱流速为1.5～15mL/min；减压浓缩：真空度为0.075～0.095Mpa，温度为50～55℃。 |
