链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质的制备方法

摘要

本发明公开了一种链霉亲和素标记的结合藻红胆素(PEB)的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质的制备方法，是通过应用藻蓝蛋白alpha亚基裂合酶催化藻红胆素(PEB)与链霉亲和素标记的藻蓝蛋白alpha亚基类脱辅基蛋白共价结合，制备链霉亲和素标记的结合PEB的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质。本发明的方法应用生物过程生产链霉亲和素标记的结合PEB的藻蓝蛋白类alpha亚基荧光蛋白质，是一种环境友好的生产方法。链霉亲和素标记的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质能应用于生物学和医药功能材料领域，特别是应用为生物学和医学检测领域的荧光探针。

主权项

一种链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质的制备方法，其特征在于包括下述步骤：(1)用基因工程方法，将alpha亚基裂合酶基因：Anabaena sp.PCC7120中cpcE和cpcF基因或M.laminosus sp.PCC7603中cpcE和cpcF基因克隆于表达载体中，得到alpha亚基裂合酶表达质粒；(2)用基因工程方法，将链霉亲和素基因：GeneBank中编号为AF283893的基因和藻蓝蛋白alpha亚基类脱辅基蛋白基因：Anabaena sp.PCC7120或M.laminosus sp.PCC7603中cpcA基因克隆于第二个表达载体中，得到链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒；(3)用基因工程方法，将来自Calothrix sp.PCC7601的pebA和pebB藻红胆素生物合成酶基因hol和pebB克隆于第三个表达载体中，得到hol和pebB表达质粒；(4)用基因工程方法，将藻红胆素生物合成酶基因pebA克隆于第四个表达载体中，得到pebA表达质粒；(5)将alpha亚基裂合酶表达质粒、链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒、hol和pebB表达质粒及pebA表达质粒依次转入同一个宿主菌，当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌通过发酵工程生产链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质；发酵后，按常规蛋白质提纯技术，提纯得到相应的链霉亲和素标记的结合藻红胆素的藻蓝蛋白alpha亚基类荧光蛋白质。