发明名称 |
来自海洋的多粘类芽孢杆菌产中性蛋白酶及其方法 |
摘要 |
本发明是一种来自海洋的多粘类芽孢杆菌L1-9(Paenibacillus polymyxaisolate L1-9)产中性蛋白酶方法,其步骤包括菌株活化、种子液的制备、产酶培养基的制备和产酶发酵培养和粗酶液的制备。该方法所产中性蛋白酶的适合反应温度为40℃,pH值为7.0;该酶在50℃以下保温20min有酶活性,在60℃以上酶活性减弱;在pH值5.0~7.0时稳定,在pH值4.0以下或9.0以上时酶活下降;金属离子Ag+、Zn2+、Cu2+、Fe3+能抑制蛋白酶的活性,而Na+、K+能提高蛋白酶活性。 |
申请公布号 |
CN101407800B |
申请公布日期 |
2011.03.02 |
申请号 |
CN200810234458.8 |
申请日期 |
2008.11.19 |
申请人 |
淮海工学院 |
发明人 |
暴增海;马桂珍;秦国民;夏振强;浦寅芳 |
分类号 |
C12N9/54(2006.01)I;C12N1/20(2006.01)I;C12R1/01(2006.01)N |
主分类号 |
C12N9/54(2006.01)I |
代理机构 |
南京众联专利代理有限公司 32206 |
代理人 |
刘喜莲 |
主权项 |
一种来自海洋的多粘类芽孢杆菌L1‑9(Paenibacillus polymyxa isolateL1‑9)产中性蛋白酶方法,其特征在于,其步骤如下:(1)菌株活化:在超净台无菌操作条件下,取多粘类芽孢杆菌L1‑9(Paenibacillus polymyxa isolate L1‑9)菌株,划线接种到PDA斜面培养基上25℃下恒温培养24h;所述的PDA斜面培养基的组成为:马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂15‑20g,海水1000ml;(2)种子液的制备:在无菌条件下将5ml PD液体培养基加入到步骤(1)所述活化好的多粘类芽孢杆菌L1‑9(Paenibacillus polymyxa isolate L1‑9)PDA斜面上,冲洗下菌苔并倒入装有45mlPD液体培养基的250ml三角瓶中,25℃,190r/min的条件,振荡培养24h,得种子液;所述的PD液体培养基的组成为:马铃薯200g,葡萄糖20g,海水1000ml;(3)产酶培养基的制备:用海水按豆饼粉2%、麸皮3%、玉米粉4%、Na2HPO4·12H2O 0.4%、KH2PO4 0.03%、CaCl2 0.1%、Na2CO3·10H2O0.1%的重量百分比配制成产酶液体培养基,调节pH值为6.0,分装在500mL三角瓶中,每瓶装液量为70mL,121.5℃灭菌20min;(4)产酶培养和粗酶液的制备:在无菌条件下按5%的接种量将种子液接种到产酶液体培养基中,在温度为25℃、转速为190r/min条件下,振荡培养42h;将培养后的菌液在4℃、10000r/min条件下,离心20min,收集上清液即得粗酶液。 |
地址 |
222006 江苏省连云港市新浦区苍梧路57号海洋学院马桂珍转 |