基于抗重组UL51蛋白抗体的鸭瘟病毒抗原捕获ELISA法

摘要

本发明涉及动物医学领域，特别涉及基于抗重组UL51蛋白抗体的鸭瘟病毒(DPV)抗原捕获ELISA法，具体步骤包括固相抗体的制备、加待测样品、与B抗重组UL51蛋白抗体IgG反应、酶标抗体反应、显色及检测并判定；本方法特异性好，可以检测阳性DPV细胞培养液及临床采集样品泄殖腔棉拭纸中的DPV抗原，而检测含DHV的鸭胚尿囊液、含RA的菌体培养液和含E.coli菌体培养液等结果均为阴性；该方法批内和批间重复试验显示变异系数分别为0.81％～1.68％和0.99％～2.82％，小于5％，能检出16ng/mL病毒抗原。

主权项

基于抗重组UL51蛋白抗体的鸭瘟病毒抗原捕获ELISA法，其特征在于，具体步骤为：a固相抗体的制备：将浓度大于或等于12.5μg/mL的A抗重组UL51蛋白抗体IgG与固相载体连结，用封闭液封闭，洗涤去除未结合的抗体及杂质，得固相抗体；b加待测样品：将待测样品与步骤a所得固相抗体保温反应并洗涤去杂质，得抗原‑A抗复合物；c与B抗重组UL51蛋白抗体IgG反应：将浓度大于或等于25μg/mL的B抗重组UL51蛋白抗体IgG与步骤b所得抗原‑A抗复合物保温反应并洗涤去杂质，得抗原‑A抗‑B抗复合物；d与酶标抗体反应：将酶标抗体作体积小于或等于2000倍的稀释，得酶标抗体稀释液，将酶标抗体稀释液与步骤c所得抗原‑A抗‑B抗复合物保温反应，得抗原‑A抗‑B抗复合物‑酶标抗体复合物；e显色：在步骤d所得酶标抗体复合物中加入色原底物避光显色后，加入终止液终止反应得显色样品液；f检测及结果判定：将步骤e所得显色样品液用酶标仪测定OD450nm值，当OD450nm值＞0.265时判为阳性，当OD450nm≤0.265时判为阴性。步骤a所述的A抗重组UL51蛋白抗体IgG中A为免疫学研究中常规实验动物中除鸭外的任一种动物，步骤c所述的B抗重组UL51蛋白抗体IgG中B为免疫学研究中常规实验动物中除A外的任一种动物，步骤d中所述酶标抗体为HRP标记的免疫学研究中常规实验动物中除A和B外的动物抗B IgG。