一种应用pH-区带精制逆流色谱分离去氢紫堇碱的方法

摘要

本发明公开了一种pH-区带精制逆流色谱分离去氢紫堇碱的方法：（1）氯仿、甲醇、水充分振摇后静置分层，取上相加入终浓度为10～20mM的无机酸作为固定相，下相加入终浓度为10～20mM的碱作为流动相；（2）取元胡的乙醇粗提物用固定相或者固定相和未碱化下相的混合溶液溶解制成样品溶液；（3）取固定相注满逆流色谱仪的分离柱，注入样品溶液，使分离柱正转，在750～850r/min转速下，以1.5～2.5ml/min的流速持续注入流动相，收集洗脱液，薄层层析和高效液相进行检测，合并与去氢紫堇碱标准品Rf值及保留时间相同且纯度大于90%的洗脱液，用旋转蒸发仪回收溶剂，得到去氢紫堇碱。本发明工艺简单，回收率高，分离得到的去氢紫堇碱纯度高，对元胡药材的充分利用有重要作用。

主权项

一种应用pH‑区带精制逆流色谱分离去氢紫堇碱的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤：（1）在分液漏斗中分别加入氯仿、甲醇、水以体积比为1.5～3:1～1.5:1组成的溶剂体系，充分振摇后静置分层，取上相加入终浓度为10～20mM的无机酸作为固定相，下相加入终浓度为10～20mM的碱作为流动相；（2）取元胡的乙醇粗提物用固定相溶解，所述的固定相加入量为25～60ml/g元胡的乙醇粗提物，溶解后制成样品溶液；（3）取固定相注满逆流色谱仪的分离柱，随后注入样品溶液，待进样完成后，开启速度控制器，使分离柱正转，在750～850r/min转速下，以1.5～2.5ml/min的流速持续注入流动相，以波长190～400nm的紫外检测器检测，用自动部分收集器收集洗脱液，薄层层析跟踪检测至洗脱液中无去氢紫堇碱组分，停止收集；（4）将步骤（3）中收集得到的洗脱液通过薄层层析和高效液相进行检测，合并与去氢紫堇碱标准品Rf值及保留时间相同且去氢紫堇碱纯度大于90%的洗脱液，用旋转蒸发仪回收溶剂，得到去氢紫堇碱。