一种静注人免疫球蛋白的制备工艺

摘要

本发明涉及一种静注人免疫球蛋白的制备工艺，属于生物制药领域。本发明在传统的5%低蛋白浓度的静注人免疫球蛋白的制备工艺的基础上，在提取过程中采用压滤法代替离心法；超滤时，将蛋白浓度调整至3%～6%，用0.5mol/L的NaOH调pH至6.4～6.6，然后加1mol/L磷酸－NaOH缓冲液调节电导率在T=19℃时测为0.175s/m～0.205s/m，调节好后，采用层析法，用离子交换柱进行上柱层析纯化；能够有效地去除杂蛋白，提高蛋白纯度，并且能够提高产品得率；使用麦芽糖或甘氨酸为保护剂，有利于提高静注人免疫球蛋白稳定性，甘氨酸作保护剂可满足了糖尿病患者临床使用；本发明可得到5-11%蛋白浓度的静注人免疫球蛋白。

主权项

一种静注人免疫球蛋白的制备工艺，其特征是制备工艺如下：（1）将符合药典要求的去除冷沉淀的血浆输送至蛋白分离反应罐；控制该血浆的温度在1～3℃之间，按不超过1.0升/分钟的流速加入pH4.0缓冲液调节pH值至6.80～7.00；再加入低于－15℃的95％乙醇或50％乙醇，流速不超过1.5升/分，使乙醇体积比终浓度至8％，温度控制在－1～－3℃，加完乙醇后的pH值为6.80～7.20；搅拌30分钟以上，进行离心，离心过程中出液流速不超过4升∕分∕台，出液温度控制在－1～－3℃，离心得组分I沉淀和组分Ⅰ上清液； （2）取上述组分Ⅰ上清液，加pH4.0缓冲液调节组分I上清液的pH值为6.80～6.85，控制流速不超过1.0升/分钟，添加低于－15℃的95％乙醇至乙醇体积比浓度为20％，温度控制在－4～－6℃；加完乙醇后，pH为6.80～7.00；搅拌120分钟以上后，静置60分钟以上，再开启搅拌，按每升反应液加入18g硅藻土，进行压滤，进液压力最高不超过0.20Mpa，压滤后得组分Ⅱ+Ⅲ沉淀和组分Ⅱ+Ⅲ上清液；（3）取10～15倍上述组分Ⅱ+Ⅲ沉淀的重量的注射用水，用氯化钠调整注射用水的钠离子浓度为0.01mol/L；加入搅拌机中开启搅拌，降温至0℃～3℃时，将上述组分Ⅱ+Ⅲ沉淀倒入搅拌机中搅拌溶解；待沉淀完全溶解，在搅拌过程中以不大于0.5升/分钟的流量缓慢加入pH4.0缓冲液到反应液中，调整反应液的pH至5.20±0.1，控制反应液温度为0℃～‑1℃，加完pH4.0缓冲液，继续搅拌至少10分钟；开启制冷循环，加低于‑15℃的95%乙醇，控制流速不大于1.5升/分钟，使反应液最终的乙醇体积比浓度为17%；反应液最终温度控制在‑4℃～‑6℃，加完乙醇继续搅拌2小时，静置4小时以上进行压缩过滤；先用‑4℃以下的压缩空气吹出滤器中的水，启动反应罐搅拌器，按每升反应液加入18g硅藻土，使硅藻土与反应液混合均匀10分钟以上边搅拌边过滤，在过滤过程中保持出液温度为‑4～‑6℃，过滤压力不超过0.2 Mpa，得压滤液上清；（4）上述压滤液上清计量后，启动反应罐搅拌器和制冷循环，控制温度为‑4～‑6℃，进行深层过滤，过滤出液温度控制在‑4～‑6℃，过滤后用1mol/L的HCl调节pH为3.8～4.0，输入超滤透析罐中进行下道工序的脱醇、纯化；  （5）开始对上述调节完毕pH值的过滤液进行超滤，浓缩至5%以上，用5倍体积的2～8℃的注射用水进行透析；将蛋白浓度调整至3%～6%，用0.5mol/L的NaOH调pH至6.4～6.6，然后加1mol/L磷酸－NaOH缓冲液调节电导率在T=19℃时测为0.175 s / m～0.205s / m ，调节好后用离子交换柱进行上柱层析纯化；层析完毕用1mol/L的HCl调节pH为3.8～4.0，开启超滤机浓缩至5%以上, 用5倍体积2～8℃注射用水进行透析，使乙醇含量≤0.025%，然后将蛋白液浓缩至6%以上，将麦芽糖或甘氨酸加入蛋白液内，用1mol/L的HCl调节pH值，使麦芽糖含量为10±1%或甘氨酸含量为2±0.2%，pH为3.8～4.4，蛋白含量为8±3％，得配制后的蛋白液；（6）配制后的蛋白液经0.2μm除菌滤芯过滤，放置在孵放室，经24℃±1℃在孵放21天；孵放结束后用DV50滤芯除病毒过滤，并根据蛋白含量调整过滤液，过滤液蛋白含量符合生产要求；用0.2μm除菌滤芯过滤分装，分装后的制品送检、灯检，检验合格后包装、入库；所述pH4.0缓冲液是由乙酸钠与冰乙酸组成的水溶液，每升水中添加244.9ml冰乙酸和65.6g乙酸钠；所述磷酸－NaOH缓冲液为每升水中添加1.6ml磷酸和1.2gNaOH；以上百分比除特别说明，其余均为重量百分比。