修饰宿主DNA中的对象区域的方法和选择性标记盒

摘要

本发明涉及使用供体DNA修饰宿主DNA中的对象区域的方法：其中所述供体DNA依序包括分别与宿主DNA中的对象区域外侧的5′-侧区、宿主DNA中的对象区域外侧的3′-侧区和宿主DNA中的对象区域内侧的第一同源重组区同源的区域，并且在与3′-侧区同源的区域和与第一同源重组区同源的区域之间还包括第一选择性标记基因、表达诱导启动子和在表达诱导启动子的控制下表达的第二选择性标记基因；该方法包括以下步骤：第一步骤，在5′-侧区和第一同源重组区的区域处进行供体DNA和宿主DNA之间的同源重组，从而基于第一选择性标记基因的表达选择与供体DNA整合的宿主；以及第二步骤，在通过第一步骤与供体DNA整合的宿主DNA内，在源自宿主DNA的3′-侧区和源自供体DNA的3′-侧区这两个区域之间进行同源重组，从而在表达诱导启动子的表达诱导条件下基于第二选择性标记基因的表达选择其对象区域被修饰的宿主。本发明还涉及本方法中使用的选择性标记盒。

主权项

一种使用供体DNA修饰宿主DNA中的对象区域的方法：其中所述供体DNA依序包括分别与所述宿主DNA中的对象区域外侧的5′‑侧区、所述宿主DNA中的对象区域外侧的3′‑侧区和所述宿主DNA中的对象区域内侧的第一同源重组区同源的区域，并且在与所述3′‑侧区同源的区域和与所述第一同源重组区同源的区域之间还包括第一选择性标记基因、表达诱导启动子和在所述表达诱导启动子的控制下表达的第二选择性标记基因；所述方法包括以下步骤：第一步骤，在所述5′‑侧区和所述第一同源重组区的区域处进行所述供体DNA和所述宿主DNA之间的同源重组，从而基于所述第一选择性标记基因的表达选择与所述供体DNA整合的宿主；以及第二步骤，在通过所述第一步骤与所述供体DNA整合的所述宿主DNA内，在源自所述宿主DNA的3′‑侧区和源自所述供体DNA的3′‑侧区这两个区域之间进行同源重组，从而在所述表达诱导启动子的表达诱导条件下基于所述第二选择性标记基因的表达选择其对象区域被修饰的宿主。