一种喜树多倍体的诱导方法

摘要

本发明公开了一种喜树多倍体的诱导方法，该方法包括的步骤是：①选取喜树的茎或叶作为外植体并进行消毒处理；②愈伤组织的培养；③多倍体的诱导及对诱导后的愈伤组织进行芽分化培养；④多倍体的鉴定；⑤多倍体苗的培养；⑥炼苗及移栽。该方法通过对喜树植物进行多倍体诱导，可以培育出喜树碱含量高的喜树四倍体组培苗，从而满足人们对喜树碱类抗癌药物的大量需求。

主权项

一种喜树多倍体的诱导方法，其特征在于：选取喜树的茎或叶作为外植体，并进行消毒处理；将消毒后的外植体接种于愈伤组织培养基中进行培养；再将培养后的愈伤组织置于浓度为100mg/L～500mg/L的秋水仙碱溶液中浸泡12～48h，然后用无菌水进行冲洗，再转移到不含秋水仙碱的芽分化培养基上暗培养7天后，转入光照培养；待不定芽生长50天后对其进行多倍体鉴定，选取具有四倍体特征的不定芽转入增殖培养基中产生四倍体丛生芽，再将生长2cm以上的丛生芽分割为单株，转入壮苗培养基中进行培养，然后选择生长健壮的无根苗接种于生根培养基中，培养出喜树四倍体组培苗，当组培苗长至3cm以上时，打开瓶盖，在室内炼苗3～5天后，移栽到灭过菌的珍珠岩——田土的基质上；上述愈伤组织培养基为：B5+NAA0～1mg/L+2，4‑D0.5～2mg/L+KT0.5mg/L；上述芽分化培养基为：MS+6‑BA0.5～1.0mg/L+NAA0.2mg/L；上述增殖培养基为：MS+NAA0.1～0.5mg/L+6‑BA1.0mg/L；上述壮苗培养基为：MS+NAA0.05mg/L+6‑BA0.3mg/L；上述生根培养基为：1/2MS+NAA0.1～0.3mg/L+IBA1.0mg/L；上述所有培养基的配制PH均为5.6～6.5，琼脂均为0.7～0.8％，其中愈伤组织培养基、芽分化培养基、增殖培养基和壮苗培养基中蔗糖含量为30g/L，生根培养基中蔗糖含量为15g/L；上述所有培养基的培养条件为：温度23～27℃、每天光照12小时、光照强度1500～2000Lx。