一种具有氨基糖苷类药物多抗原决定簇人工抗原的合成方法

摘要

一种具有氨基糖苷类药物多抗原决定簇人工抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明以新霉素、卡那霉素和庆大霉素为半抗原，用碳二亚胺法将其与载体蛋白牛血清蛋白BSA偶联，用凝胶电泳法测定偶联物的偶联比。本发明成功合成了具有氨基糖苷类药物多抗原决定簇的人工抗原，合成步骤简洁，有效，完全可用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了必需的人工抗原，可以满足国内对氨基糖苷类药物研究的需要。

主权项

一种具有氨基糖苷类药物多抗原决定簇人工抗原的合成方法，其特征是以新霉素、卡那霉素和庆大霉素为半抗原，用碳二亚胺法将其与载体蛋白牛血清蛋白BSA偶联，用凝胶电泳法测定偶联物的偶联比；步骤为：(1)偶联物(NM)L‑BSA的制备20‑50mg新霉素NM、40mg牛血清蛋白BSA溶于3mL 0.01mol/L的PBS缓冲液，逐滴加入现配的水溶性碳二亚胺EDC的甲醇溶液，室温轻柔搅拌3小时，即得偶联物(NM)L‑BSA混合液；透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；将偶联物(NM)L‑BSA混合液放入透析袋于0.01mol/L的PBS中透析3天，每天三次换液，用聚乙二醇20000浓缩至3mL备用；(2)偶联物(NM)L‑(KM)m‑BSA的制备将20‑50mg卡那霉素KM加入到(NM)L‑BSA的PBS溶液中，逐滴加入现配的水溶性碳二亚胺的甲醇溶液，室温轻柔搅拌3小时，即得偶联物(NM)L‑(KM)m‑BSA混合液；透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；将偶联物(NM)L‑(KM)m‑BSA混合液放入透析袋于0.01mol/L的PBS中透析3天，每天三次换液，用聚乙二醇20000浓缩至3mL备用；(3)人工抗原(NM)L‑(KM)m‑(GM)n‑BSA的制备将20‑50mg庆大霉素GM加入到(NM)L‑(KM)m‑BSA的PBS溶液中，逐滴加入现配的水溶性碳二亚胺的甲醇溶液，室温轻柔搅拌3小时，即得人工抗原(NM)L‑(KM)m‑(GM)n‑BSA的混合液；透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；将(NM)L‑(KM)m‑(GM)n‑BSA的混合液放入透析袋于0.01mol/L的PBS中透析3天，每天三次换液，最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末，即得到具有氨基糖苷类药物多抗原决定簇的人工抗原(NM)L‑(KM)m‑(GM)n‑BSA；(4)具有氨基糖苷类药物多抗原决定簇的人工抗原的鉴定人工抗原采用凝胶电泳法鉴定其偶联结果，利用标准蛋白得到标准曲线，计算其偶联比。