微生物发酵生产低温纤维素酶的方法

摘要

本发明所述的一种微生物发酵生产低温纤维素酶的方法是将产生纤维素酶的微生物逐级低温驯化，使其在低温环境中生长良好；将低温驯化后的纤维素酶产生菌在10～16℃逐级扩大培养，按发酵液体积的3～9％接种量接入液体发酵培养基中，在10～16℃培养72～144h时，即微生物发酵生产低温纤维素酶结束；发酵液在4,000～8,000rpm离心收集液体，收集的液体即为粗酶液；根据不同需要和使用对象不同，可以将粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。

主权项

一种微生物发酵生产低温纤维素酶的方法，其包括以下步骤：(1)将产生纤维素酶的微生物逐级低温驯化，驯化温度由高到低，25℃→22℃→20℃→18℃→16℃→14℃→12℃→10℃，使其在低温环境中生长良好；菌种低温驯化培养基：马铃薯50.0～100.0g，新华滤纸粉5.0～8.0g，麸皮2.0～6.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1.0L，pH值自然，121℃高压蒸气灭菌30min；(2)按常规方法将低温驯化后的纤维素酶产生菌在10～16℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；液体种子培养基：水稻秸秆粉3.0～5.0g，蛋白胨0.5～1.0g，Tween80 0.1～0.3g，(NH4)2SO4 0.8～1.2g，KH2PO4 1.2～1.8g，尿素0.2～0.4g，MgSO40.2～0.3g，CaCl2 0.1～0.2g，ZnSO4·7H2O 1.2mg，MnSO4·H2O 1.6mg，CoCl21.8mg，自来水1.0L，pH值自然，121℃高压蒸气灭菌30min；(3)将液体一级种子或二级种子，按发酵液体积的3～9％接种量接入产酶培养基中，在10～16℃培养72～144h时，即微生物发酵生产低温纤维素酶结束；产酶培养基：水稻秸秆粉7.0～12.0g，麸皮1.0～5.0g，Tween80 0.1～0.4g，(NH4)2SO4 1.0～1.5g，KH2PO4 1.4～2.0g，尿素0.2～0.6g，MgSO4 0.1～0.4g，CaCl2 0.2～0.3g，ZnSO4·7H2O 2.4mg，MnSO4·H2O 3.2mg，CoCl2 3.6mg，自来水1.0L，pH值6.0，121℃高压蒸气灭菌30min；(4)将(3)的发酵液在4,000～8,000rpm离心收集液体，收集到的液体即为粗酶液；(5)根据不同需要和使用对象不同，将(4)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。