创伤弧菌全菌免疫刺激复合物疫苗的制备工艺及其在水生动物的应用

摘要

本发明涉及一种创伤弧菌全菌免疫刺激复合物疫苗的制备工艺及其在水生动物的应用，它包括如下步骤：(1)将创伤弧菌进行预扩增与扩大培养，(2)对培养后的发酵菌液中的创伤弧菌进行灭活，(3)对灭活的菌液进行无活菌检验，(4)离心收集灭活的创伤弧菌，(5)然后对收集的灭活创伤弧菌进行超声波破碎，(6)免疫刺激复合物组分的配制，(7)超声波处理制备免疫刺激复合物。本发明选用的创伤弧菌毒力较强(LD 50约为200cfu/g)、且培养条件和优化的培养基能使发酵液的活菌生物含量实现翻番，培养出的创伤弧菌生物量高达50mg/ml以上；为创伤弧菌疫苗的产业化发酵生产提供了强有力的技术支持。

主权项

一种创伤弧菌全菌免疫刺激复合物疫苗的制备工艺，其特征在于，它包括如下步骤：(1)将创伤弧菌进行预扩增与扩大培养，(2)对培养后的发酵菌液中的创伤弧菌进行灭活，(3)对灭活的菌液进行无活菌检验(4)离心收集灭活的创伤弧菌，(5)然后对收集的灭活创伤弧菌进行超声波破碎，(6)免疫刺激复合物组分的配制，(7)超声波处理制备免疫刺激复合物；将创伤弧菌进行预扩增与扩大培养的方法为：选择TSB培养基和改良的TSB培养基；将经常规检测合格的创伤弧菌毒株接种到含有TSB的细菌培养物的50mlTSB的250ml三角瓶中，在25‑31℃恒温、100‑200转/分钟的条件下振荡培养14‑18小时，将该培养液作为种子液；以0.5‑10％预扩增的培养物接种于发酵罐内的新鲜高压灭菌的改良TSB培养液中大规模培养36‑60小时；所述的改良的TSB培养液体积重量百分比W/V的成分为：葡萄糖0.18％‑0.22％、胰蛋白胨1.2％‑1.8％、大豆胨0.2％‑0.6％、玉米浆0.2％‑0.6％、磷酸氢二钾0.15％‑0.25％、氯化钠1.0％‑2.0％、磷酸铁0.0005％‑0.002％和酵母膏0.05％‑0.2％；发酵培养条件参数为：接种量为培养基体积的0.5‑10％、温度25‑31℃、转速100‑200转/分钟；空气流量为35‑151/min；培养基的pH值6.5‑7.5；发酵20‑28小时后按间隔3‑10分钟、自动工作15‑20秒补浓缩料共500ml，所述的浓缩料的重量份数比为葡萄糖1份和大豆胨3份，收集后即为发酵菌液。