含人组织因子途径抑制因子和GFP的真核双表达载体及构建方法

摘要

本发明公开了含人组织因子途径抑制因子和GFP的真核双表达载体及构建方法，载体是用下述方法制成：以序列表SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所述序列为PCR引物，以pIRES-TFPI为模板，扩增出人组织因子途径抑制因子基因阅读框架，回收得SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列，与pIRES2-AcGFP1-Nuc加入T4连接酶进行反应制成。本发明的载体，使得TFPI和GFP的基因从同一个双顺反子mRNA互不干扰地同时表达，实现了通过观察GFP即可确定TFPI基因表达的目的，同时经检测证明了该载体不但能够在细胞内互不干扰的同时表达TFPI和GFP基因而且能够分泌TFPI蛋白到细胞外。

主权项

含人组织因子途径抑制因子和GFP的真核双表达载体，其特征是用下述方法制成：以序列表SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所述序列为PCR引物，以pIRES‑TFPI为模板，扩增出人组织因子途径抑制因子基因阅读框架，回收得序列表SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列，与pIRES2‑AcGFP1‑Nuc加入T4连接酶进行反应，制成含人组织因子途径抑制因子和GFP的真核双表达载体pIRES2‑AcGFP1‑Nuc‑TFPI。