一种加入内控核酸对病原体核酸进行半定量检测的方法

摘要

本发明属于核酸检测领域，公开了一种加入内控核酸对病原体核酸进行半定量检测的方法。本发明在目的核酸的提取、扩增以及试纸条检测全程中加入相应内控，使内控和目的片段平行接受操作，最终通过试纸条上检测线、内控线及质控线三条带的显色有无和强度对比进行半定量检测。本发明使目的核酸在被处理的全过程都有相应内控作为阳性对照，避免了在试纸条检测的过程中由于提取、扩增或点样失误等环节使结果出现假阴性的情况。同时通过比较内控线与样本线的显色强度，在免疫层析试纸条定性功能的基础上引入了半定量功能，估测被测样本的拷贝数，使检测结果更为详细、准确和可靠。本发明操作便利、快速，可满足临床实际需要。

主权项

一种加入内控核酸片段对目的核酸进行试纸条半定量可视化检测的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)针对目的核酸制备与目的核酸片段Tm值相近的内控核酸片段；(2)在待检样本中加入浓度及序列均已知的内控核酸片段，同时提取待检样本中的核酸以及内控核酸；(3)以步骤(2)提取得到的提取液为模板，在单管中加入针对目的核酸片段和内控核酸片段的修饰有检测用抗原的混合引物同时扩增目的核酸片段和内控核酸片段，得到带有检测用抗原的扩增产物混合液；(4)将步骤(3)得到的含目的核酸扩增产物和内控核酸扩增产物的扩增产物混合液点样在免疫层析试纸条上进行免疫层析，通过层析方向上不同位置条带的有无对目的核酸进行定性，通过比较目的核酸与内控核酸检测条带的显色强度，估测被测样本的拷贝数，对目的核酸进行半定量分析；所述的层析方向上不同位置条带处分别修饰有与检测用抗原相对应的抗体。