一种微囊藻毒素的提取和纯化方法

摘要

本发明公开了一种微囊藻毒素的提取和纯化方法，是一种以收获于野外的水华蓝藻的干粉为原料，从中提取高纯度的微囊藻毒素MC-RR与MC-LR的方法，步骤如下：A、甲醇粗提微囊藻毒素MC-RR与MC-LR；B、粗提液过ODS柱精提微囊藻毒素MC-RR与MC-LR；C、半制备色谱仪分离微囊藻毒素MC-RR与MC-LR；D、微囊藻毒素MC-RR与MC-LR保存。本发明方法原料来源广，成本低，操作过程简单，并且所提取出的微囊藻毒素的纯度均在97%以上，符合科研工作对毒素纯度的要求。

主权项

一种微囊藻毒素的提取和纯化方法，步骤如下：①、称取蓝藻藻粉，按30‑40ml/g的比例加入60v/v%的甲醇溶解8‑20℃下200rpm摇床振荡1h，再超声促溶处理20min后，移入离心管，离心使固液分离；②、倾出上清液，步骤①中得到的沉淀再用60v/v%的甲醇重复提取一次，合并两次提取的上清液；③、调节步骤②得到的上清液的pH至4，静置60min后，移入离心管，离心后，倾出上清液，调节上清液的pH至8；④、将步骤③最后得到的溶液浓缩，每3g藻粉得到40ml粗提液；⑤、每10ml粗提液注入一个ODS柱，每个ODS柱依次用20v/v%甲醇30ml、 30v/v%甲醇20ml、40v/v%甲醇10ml冲洗；再用含有0.02v/v%三氟乙酸的70v/v%甲醇溶液10ml洗脱，弃去洗脱液；然后用含0.02v/v%三氟乙酸的70v/v%甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，直至洗脱液无色；⑥、将步骤⑤中收集的洗脱液混合后，旋转蒸发至溶剂完全挥发；⑦、按每3g藻粉原料加入1.5ml 50v/v%甲醇溶液溶解步骤⑥得到的固形物，离心后的上清液为精提液；⑧、精提液注入waters半制备色谱仪，收集MC‑RR和MC‑LR峰，收集完后，分别合并从半制备色谱仪上收集到的MC‑RR和MC‑LR洗脱液，移入圆底烧瓶，旋转蒸发至干固，均加入甲醇溶解；⑨、将步骤⑧得到的MC‑RR和MC‑LR的甲醇溶液分别挥干溶剂后，铝箔包裹，‑80℃保存。