一种以甜高粱幼穗或幼穗诱导愈伤组织为外植体遗传转化方法

摘要

本发明为“一种以甜高粱幼穗或幼穗诱导愈伤组织为外植体遗传转化方法”，属植物基因工程技术领域。本发明对甜高粱幼穗外植体诱导愈伤组织，采用农杆菌介导法转化外源基因，通过预培养，然后共培养，再筛选培养，得到抗性愈伤，再将其继代分化培养、出芽、生根，移栽得到转化植株。本发明利用所建立的遗传转化体系转化甜高粱植物获得转基因抗虫植株。本发明为利用生物技术改良甜高粱的品质和提高抗逆性等研究提供了技术支撑，也为加快甜高粱的基础研究打下了很好的基础。

主权项

一种以甜高粱幼穗或幼穗诱导愈伤组织为外植体的遗传转化方法，包括如下顺序步骤：1)选取幼穗，旗叶期长约2‑5cm幼穗，切成薄片，2)将幼穗诱导产生的胚性愈伤组织或幼穗薄片接种于预培养基中培养，所述预培养基为YS‑P：MS无机盐+MS有机物+2，4‑D2mg/L+ZT 2.0mg/L+KT 0.2mg/L+PVP 10mg/L+水解酪蛋白500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L+AS100μmol/L，pH 5.8；所述幼穗诱导产生的胚性愈伤组织为将薄片接种于诱导培养基上诱导愈伤而得到，所述诱导培养基为：MS基础培养基+2，4‑D 2mg/L+ZT2.0mg/L+PVP 10mg/L+抗坏血酸10mg/L+水解酪蛋白500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.2g/L，pH5.8；3)农杆菌介导法导入外源基因；4)接种于共培养基中共培养，所述共培养基YS‑C为：MS无机盐+MS有机物+2，4‑D 2mg/L+ZT 2.0mg/L+KT 0.2mg/L+PVP 500mg/L+抗坏血酸10mg/L+水解酪蛋白500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L+AS 100μmol/L，pH 5.6；5)再转入筛选培养基上进行梯度筛选培养，所述筛选培养基为：MS无机盐+MS有机物+2，4‑D 2mg/L+ZT 2.0mg/L+KT 0.2mg/L+PVP 10mg/L+抗坏血酸10mg/L+水解酪蛋白500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L+羧苄青霉素250mg/L+不同浓度的双丙氨膦，pH 5.8；6)将存活的抗性愈伤组织转接于分化培养基中培养至出苗，所述分化培养基为：MS无机盐+MS有机物+2，4‑D 2mg/L+ZT 2.0mg/L+KT 2mg/L+PVP 10mg/L+羧苄青霉素125mg/L+30g/L蔗糖+8g/L琼脂，pH 5.8；7)将苗移入生根培养基中培养出根，所述生根培养基为：1/2MS基础培养基+肌醇50mg/L+NAA 0.400mg/L+IBA 2mg/L+PVP10mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH 5.8；8)转移至蛭石培养基上过渡培养1‑2周后移栽至温室花盆或大田。