副溶血弧菌二价DNA疫苗及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及副溶血弧菌二价DNA疫苗及其制备方法和应用，其特征是将副溶血弧菌tdh2基因和vps基因通过6个核苷酸GAATTC相连成的tdh2-vps融合基因蛋白真核表达工程载体疫苗；其制备方法包括：利用双酶切技术使基因tdh2和vps获得粘性末端后相连，并克隆到原核表达载体pET28a中构建得到融合基因蛋白原核表达工程载体；再通过双酶切技术，将该融合基因插入到真核载体中构建得到融合基因蛋白真核表达工程载体疫苗；最后用常规的方法制成副溶血弧菌二价DNA疫苗悬液。本发明操作性强重复率高，安全无毒副作用，可对鱼类双重免疫保护，免疫效果较灭活疫苗、重组蛋白疫苗及一价DNA疫苗高。

主权项

一种副溶血弧菌二价DNA疫苗，其特征在于：所述的疫苗为副溶血弧菌溶血素亚单位基因tdh2和丝氨酸蛋白酶基因vps通过6个核苷酸GAATTC相连而成的tdh2‑vps融合基因蛋白原核或真核表达工程载体疫苗，其中tdh2‑vps融合基因的DNA序列为：ATGAAGTACCGATATTTTGCAAAAAAATCATTTTTATTTATATCCATGTTGGCTGCATTCAAAACATTTGCCTTTGAGCTTCCATCTGTCCCTTTTCCTGCCCCCGGTTCTGATGAGATATTGTTTGTTGTTCGAGATACAACTTTTAATACCAATGCACCGGTCAATGTAGAGGTCTCTGACTTTTGGACAAACCGTAATGTAAAAAGAAAACCGTACAAAGATGTTTATGGTCAATCAGTATTCACAACGTCAGGTACTAAATGGCTGACATCCTACATGACTGTGAACATTAATGATAAAGACTATACAATGGCAGCGGTGTCTGGCTATAAGCACGGTCATTCTGCTGTGTTCGTAAAATCAGATCAAGTACAGCTTCAACATTCCTATGATTCTGTAGCTAACTTTGTTGGTGAAGATGAAGATTCTATTCCAAGTAAAATGTATTTGGATGAAACTCCAGAATATTTTGTTAATGTAGAAGCATATGAGAGTGGTAGTGGTAATATATTGGTAATGTGTATATCCAACAAAGAATCGTTTTTTGAATGTAAACATCAACAAGAATTCATGGAAACACGCTTTAATCGCCTATTTGCCGCTATGTTGGCTGTGGGCCTTGCACCTGCCGTCTCGGCGTTTGATCCGCTCTATTCAGAACAATGGCATCTCGACAACACTGGTCAAATTGCATTCGCAGCAAACCCTGCTGTTGCAGGTAATGACTTAAACACCAAACTTACGCAAGCCATGGGCATTGCCGGTATTGGCGTTAAAGTTGCGGTCATTGATTCTGGTGTGCAGATCGATCACCCAGACCTTGCAGGTAACGTAGTCACAGGTAGCAGAAACTTCGTTGAAGACTCTTTATTCCCATCCAGTTATCCCGTCGACACTAACGGCCACGGTACTGCCGTTGCTGGTTTGATTAGTGCGGTAGGTAACAATGGTGAAGGTGGTCGCGGCGTTGCTTCTCGCTCTTCGCTTGTTGGTTTTAACTGGCTTGCAAACCAAACATTAGAAGGTTGGTTAATTTCTCACGGTATGGACCCAGCGACGCGAGATGTACGCGTATTTAACCAAAGTTATGGCTTTAGTCCGATCAACCCAATCGCGTTTGATGAGAATGACCCACAGTTCAAGCTTGAAATGGATGTCATGCAGAACGTCAGCGAAACGAACGCTTGGGGCCGCGGTGCACTGTTTGTCAAGTCTGCGGGGAATGGTTACCGCTATTTCAACACCGGACGATTCTTCGTTCTTCCTAGCGATTTCTTCGCGGGAGGAGGAAACCAAGGTTTACCGATGCACAACTCGGCGCAATCTTACGACAACTCTAGCTACTTCAACCTTGTCACCAGCGCGCTACGCGCAGATGGCACCCGAGCAAGTTACTCTTCTGTTGGCGCTAACGTGTGGGTTGCCGCGCCAGCAGGGGAATACGGGCAAGACTTCCCTGCGATGGTCACAACTGACCTGATGGGATGTGAAGAAGGACAAAACACCAGTGACGGCCTTGGTATTAATGGTCTACACGGTGGTACAGAGCTTGACCCGAACTGTAATTACACCAGCACCATGAACGGCACATCATCGGCTGCGCCGAACACTTCTGGTGCAATCGCCGCTATCATGTCAACTAACCACGCTTTATCTGCCCGTGATATTCGTGCGTTGCTGGCAGAAACCGCACGCGTTACCGATGCCGAGCATCCGGGTGTTCAACTTGAATTTACCAATAATAAAGGTGAGTTGGTGAGCTACGAAGCGATCTCACCTTGGCAGAAAAACGCGGCTGGCGTGAACTTCCATACCTTCTATGGTTTTGGTGCCGTTGATTTGGATGAAGCGATGAAACGCGCTCGCATGACAAATAATGTTCTGCCAGCGCAAATCATCACACCGTGGGCAAACAATGCAACAGAAGTCAGTGTGCCCGATGCAAGCCTTGCTGGTGGTTCGTCAAACATCGCAATTACTGACGACATTACCGTTGAGTCTGTACAGGTGAAGTTGACGCTAGAGCACTCGCGTCTACCTGATTTGGCAATCGAGCTTGTTTCTCCATCAGGCACTCGCTCCGTATTGCAAACACCACGTAACGGCCTTGTTGGTCAGTCTCTTGATCCAAACATTACGGGTTACGAAAACCAACTGATGTTGTCTAACCAATTCTACGGCGAGAATGCCAAGGGTGAATGGACACTGAGAGCTATCGATACAAACGGTGATGAAGTCTTCTCGTTTATCGCTTACTTCAACTCATCCGCTATCTATGATGTACCGATGGCGAACAACGCAAAACCAGGAGTTATCAAAAACTGGTCTATGCGTATCTTTGGCCACTAA。