采用酸酶复合制备天然活性胶原蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种采用酸酶复合制备天然活性胶原蛋白的方法，本发明采用酸酶复合，可同一批原料制备得到具有结构完整的酸溶性天然胶原蛋白和具有更好生物相容性的胃蛋白酶可溶性胶原蛋白，不但大大缩短生产周期，并且工艺设备要求低，生产成本低，产品得率高于55％，得到的活性胶原蛋白可广泛用于整容、化妆品及生医材料等方面。

主权项

采用酸酶复合制备天然活性胶原蛋白的方法，包括如下步骤：(1)先将脱脂去除非胶原蛋白后的动物皮，用pH2‑4的缓冲液浸泡4‑6小时后机械匀浆成浆状，温度控制在25‑40℃，然后使用上述pH2‑4缓冲液，将料液的质量体积比增加到1∶20‑40，提取3‑9小时后，在4‑24℃下离心分离，收集上清液，加入(NH4)2SO4，使最终质量分数达到20‑30％，盐析3‑12小时后，4‑24℃下离心分离得到的沉淀用0.1‑1M乙酸溶解后，相对于0.01‑0.1M乙酸溶液进行透析，每间隔6‑12h换液并逐渐降低乙酸浓度，2‑4次后用双蒸水代替，再进行2‑4次，最终蛋白溶液pH至5～7时，冻干，得到酸溶性天然活性胶原蛋白；所述的缓冲液选自乙酸‑乙酸钠缓冲液或柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液，缓冲液的离子强度为0.2M～0.6M；(2)将步骤(1)酸提取结束后离心分离得到的沉降物，加入胃蛋白酶，酶料的质量比为1∶100‑1∶300，酶解3‑8小时，然后加入NaOH溶液，调pH至8‑12，4‑24℃离心分离，上清液静置灭酶2‑8小时后，加入Tris至0.01‑0.1M，用HCl调pH至7‑8，然后加入(NH4)2SO4，使最终质量分数达到20‑30％，盐析3‑12小时，得到的沉淀用0.1‑1M乙酸溶解后，相对于0.01‑0.1M乙酸溶液进行透析，每间隔6‑12h换液并逐渐降低乙酸浓度，2‑4次后用双蒸水代替，再进行2‑4次，最终蛋白溶液pH至5～7时，冻干，得到胃蛋白酶可溶性活性胶原蛋白。