一种羊水来源的间充质干细胞的分离纯化方法

摘要

本发明提供了一种源于产前诊断羊水培养物废弃上清的羊水间充质干细胞的分离纯化方法。所述细胞经过特定培养基下经过极低密度种植而成的成纤维样羊水间充质干细胞，该细胞具有多向分化能力，与成体细胞相比还具有良好的扩增能力，可传代至15以上而保持原来的特性。本发明的有益效果主要体现在：(1)本发明的原料获取方便、不存在伦理问题，具备极强的使用价值；(2)本发明所获得细胞具有良好的扩增能力，可传至15代而保持特性，并具有多向分化能力；(3)本发明所获得细胞获得方法简单、效率高、无需流式，磁珠等分离纯化方法，大大降低了获得高纯度人羊水干细胞的成本；(4)本发明细胞适合于胎儿组织工程、细胞治疗、药物筛选和作为组织工程的种子细胞。

主权项

一种羊水来源的间充质干细胞的分离纯化方法，所述方法包括如下顺序步骤：(1)取产前诊断羊水培养物的废弃上清，以500～1000ce1l/cm2密度种植到培养瓶，培养至出现梭形类成纤维细胞样的间充质干细胞集落，去除非贴壁细胞，加入细胞培养液I继续培养4～7天，每2～3天换新鲜培养液；所述细胞培养基I终浓度组成如下：15％FBS+4～8ng/ml bFGF+100U/ml青霉素+100U/ml链霉素，溶剂为低糖DMEM培养液；(2)取步骤(1)培养获得的细胞以5～10cell/cm2密度种植于培养皿上，加入细胞培养液II培养直至单克隆细胞长出，即得所述羊水来源的间充质干细胞；所述细胞培养液II终浓度组成如下：20％FBS+4～8ng/ml bFGF+100U/ml青霉素+100U/ml链霉素，溶剂为低糖DMEM培养液。