一种二苯甲酮的酶联免疫检测方法

摘要

一种二苯甲酮的酶联免疫检测方法，属于有毒化学品残留检测技术领域。本发明公开了利用合成的4-氨基二苯甲酮与BSA偶联物免疫原免疫得到多克隆抗体，以4-氨基二苯甲酮半抗原与OVA的偶联物作为包被抗原，以二苯甲酮为标准品，建立了包装材料中二苯甲酮的间接竞争酶联免疫检测方法。本发明为二苯甲酮在包装材料中的残留检测提供了快速高效的检测手段，由于采用的是多克隆抗体，费用较低并且稳定性和重复性较好。灵敏度为0.5ppm，线性范围为1-100ppm。免疫反应的高特异性和亲和性使ELISA具有极高的选择性和灵敏度。

主权项

一种二苯甲酮的酶联免疫检测方法，其特征在于利用合成的4‑氨基二苯甲酮与BSA偶联物免疫原免疫得到多克隆抗体，以4‑氨基二苯甲酮半抗原与卵清蛋白OVA的偶联物作为包被抗原，以二苯甲酮为标准品，建立了包装材料纸中二苯甲酮的间接竞争酶联免疫检测方法；步骤如下：（1）以0.05M的碳酸盐缓冲溶液稀释包被抗原1:1000~1:64000，加入酶标板中，每孔加入100μL，4℃孵育过夜，按照常规ELISA方法封闭洗涤；（2）用PBST将二苯甲酮标准品稀释成0.5、1、5、10、20、50ng/mL系列浓度，将系列浓度之一的二苯甲酮标准品或待测样品加入酶标板中，每孔加50μL；同时加入以抗体稀释液稀释1:1000~1:4000的多克隆抗体，每孔加50μL，37℃孵育1h后以PBST洗涤3~5次；（3）以抗体稀释液将辣根过氧化物酶标记的羊抗兔GAR‑HRP稀释为1:3000，每孔加100μL，37℃孵育1h后以PBST洗涤3~5次；（4）配置显色液A液：0.933 g柠檬酸，3.68 g Na2HPO4·12H2O，18 μL30%H2O2用超纯水定容至100 mL；B液：60 mg 3,3/,5,5/‑四甲基联苯胺TMB溶于100 mL乙二醇中；使用前将A液与B液以5:1体积混合；（5）每孔加入显色液100μL，37℃显色15min；每孔加入终止液2M 硫酸溶液100μL；酶标仪450nm测吸光值OD。