发明名称 |
一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方法 |
摘要 |
本发明公开了一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方法。该制备方法包括:ST细胞或IBRS-2细胞的复苏培养;ST细胞或IBRS-2细胞的生物反应器微载体培养;ST细胞或IBRS-2细胞的生物反应器微载体的连续培养;接种猪细小病毒培养;收集病毒液,灭活病毒,制成猪细小病毒灭活疫苗。本发明的猪细小病毒灭活疫苗的制备方法,为采用反应器微载体培养ST细胞的猪细小病毒工艺,微载体提供了更大的表面积,不仅能提高ST细胞密度,提高病毒滴度,而且反应器能自动监控细胞生长或病毒繁殖时的最适生化条件,每批反应器生产上清的病毒滴度均一批间小、质量稳定。 |
申请公布号 |
CN101947318A |
申请公布日期 |
2011.01.19 |
申请号 |
CN201010277502.0 |
申请日期 |
2010.09.09 |
申请人 |
扬州优邦生物制药有限公司;扬州威克生物工程有限公司 |
发明人 |
李玉和;史春云;刁文华;潘杰;傅元华 |
分类号 |
A61K39/23(2006.01)I;C12N7/00(2006.01)I;A61P31/20(2006.01)I |
主分类号 |
A61K39/23(2006.01)I |
代理机构 |
南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 |
代理人 |
柏尚春 |
主权项 |
一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)ST细胞或IBRS‑2细胞的复苏培养;用方瓶培养从液氮中复苏的ST细胞或IBRS‑2细胞,培养条件包括:pH值7.0~7.3、温度35~37℃,培养基为DMEM;培养48~72h,培养至细胞浓度为3~6×105cells/ml,即可;(2)ST细胞或IBRS‑2细胞的生物反应器微载体培养;细胞接种密度为1~2×105cells/ml,微载体浓度为3~5g/L,溶氧为30%~60%,pH值7.0~7.3,温度35~37℃,转速40~60r/min,培养基为DMEM;培养至细胞浓度为3~5×106cells/ml;其中,微载体为球状载体Cytodex1或片状载体;(3)ST细胞或IBRS‑2细胞的生物反应器微载体的连续培养;以一定速度向生物反应器中连续添加新鲜的DMEM培养基,同时用相同的速度向外排出培养好的ST细胞或IBRS‑2细胞,保证ST细胞或IBRS‑2细胞在反应器中停留时间内扩增至浓度为3~5×106cells/ml,即可;(4)接种猪细小病毒培养;将猪细小病毒接种于连续培养ST细胞或IBRS‑2细胞的生物反应器中进行培养,接种MOI为0.01,培养条件包括:溶氧30‑60%、PH值7.1‑7.4、温度35‑37℃,使病毒含量达到≥106.0TCID50/ml;(5)收集病毒液,灭活病毒,制成猪细小病毒灭活疫苗。 |
地址 |
225008 江苏省扬州市维扬经济开发区金槐路 |