利用小孢子培养和无性克隆技术选育甘蓝型油菜隐性核不育系的方法

摘要

本发明公开了一种利用小孢子培养和无性克隆技术选育甘蓝型油菜隐性核不育系的方法，通过优良的品种/系与隐性核不育不育系或临保系杂交，获得F1代；然后以甘蓝型油菜小孢子培养技术对F1代植株的游离小孢子进行诱导培养，从而获得DH株系；再以表现为不育性状的DH株系和临保系测交，测交种为100％不育，对应的不育DH株系即为本发明所述的隐性核不育系，然后利用无性克隆技术可以快速获得大量用于全不育生产的不育系植株。本发明可以快速获得遗传背景稳定优良的不育系并在甘蓝型油菜隐性核不育杂交育种上得到应用。

主权项

一种利用小孢子培养和无性克隆技术选育甘蓝型油菜隐性核不育系的方法，其特征在于，包括以下步骤：a、以F1代植株为供体，在花蕾期，每次从油菜花序上取3～4mm大小的蕾，表面消毒后用无菌水清洗3次；加入B5培养液研磨，用40μm尼龙网过滤，滤液经过100g离心5‑8min，吸去上清液后，再向离心管中加含秋水仙碱的NLN‑16培养液密封，置于32℃的恒温箱中暗培养48h，然后重复上述步骤离心，吸去上清液，加入NLN‑13培养液分装到培养皿中，密封，置于25℃的恒温箱中暗培养，当肉眼可见到胚状体后转到摇床上继续培养1‑2周；b、将上述a步中的胚状体转移到固体B5培养基上，在10℃的光照培养室中诱导形成小植株，然后置于25℃的光照培养室中培养，并将每个不同基因型的小植株扩繁多个拷贝；c、将上述b步中的小植株分不同基因型种植到田间，到花期，将加倍成功，且表现为不育的DH株系与隐性核不育临保系测交；d、将上述c步中测交种进行鉴定，若测交种为全部不育，则对应的单株即为隐性核不育系。