一种构建T载体的方法

摘要

本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种构建T载体的方法。该方法以pGEM-T Easy Vector、pBS-T Vector、pSURE-T Vector为出发载体与Xcm I盒连接得到前T载体，然后用Xcm I限制性内切酶酶切前T载体，回收线性化载体，得到T载体，所述Xcm I盒序列包括间隔DNA序列和紧密连接于所述间隔DNA序列两侧的各一个附加序列，所述附加序列包括Xcm I酶切位点序列和Xcm I酶切位点序列5′端的3个保护碱基。本发明所述构建T载体的方法简单高效，所获得的T载体质量稳定，自身环化率低，克隆效果高，并且可以避免3n+2个核苷酸的cDNA序列在基因表达时发生移码。

主权项

一种构建T载体的方法，包括：步骤1：出发载体与Xcm I盒连接，得前T载体；步骤2：Xcm I限制性内切酶酶切步骤1所得前T载体，回收线性化载体，得到T载体；其中，所述出发载体为pGEM‑T Easy Vector、pBS‑T Vector、pSURE‑TVector，所述Xcm I盒序列包括间隔DNA序列和紧密连接于所述间隔DNA序列两侧的各一个附加序列，所述附加序列包括Xcm I酶切位点序列和XcmI酶切位点序列5′端的3个保护碱基。