一种高效纯化金属离子结合蛋白的疏水层析分离纯化方法

摘要

本发明一种高效纯化金属离子结合蛋白的疏水层析分离纯化方法，其步骤为：选取含有金属离子结合蛋白的待分离物料，添加沉淀剂进行沉淀粗分离获得蛋白混合物。在蛋白混合物中添加过量的螯合剂去除目标蛋白的辅基金属离子I，透析去除螯合剂后添加适量不易沉淀的金属离子II，以保持目标蛋白的三级结构。将处理所得蛋白混合物进行疏水层析分离操作，并在层析缓冲液中添加适量的金属离子II，由于金属离子辅基II可以有效地保持目标蛋白的天然结构，因此可以有效地提高目标蛋白与杂蛋白在疏水层析中的分辨率。进一步通过凝胶过滤层析可以得到高纯度、高回收率的金属离子结合蛋白的纯品，生产工艺稳定，适于规模化生产。

主权项

高效纯化金属离子结合蛋白的疏水层析分离纯化方法，其步骤包括：1)选取至少含有金属离子结合蛋白的待分离原料，沉淀离心去除脂类等杂质后收集上清液获得蛋白混合物；2)在所得蛋白混合物中添加过量的金属离子螯合剂去除目标蛋白中的辅基金属离子I；3)所得蛋白混合物进行透析操作去除金属离子螯合剂；4)在所得蛋白混合物中添加适量的辅基金属离子II；5)在疏水层析缓冲液中添加适量的辅基金属离子II；6)将蛋白混合物经过疏水作用层析和凝胶过滤层析联用的组合层析，分离得到金属离子结合蛋白。