癌细胞靶向诊断聚酰胺胺/碳纳米管复合材料的制备方法

摘要

本发明涉及一种癌细胞靶向诊断聚酰胺胺树状大分子/碳纳米管复合材料的制备方法，包括：碳纳米管CNT进行酸化处理；聚酰胺胺树状大分子的异硫氰酸荧光素FI和叶酸FA的修饰；通过EDC化学键合法与酸化处理后的多壁碳纳米管表面的羧基反应，得到CNT复合物；将复合物表面剩余的树状大分子的端氨基与醋酸酐进行乙酰化反应，得到表面电荷呈中性的功能性复合碳纳米管。该功能化碳纳米管能够长时间地分散在溶液中，没有团聚现象发生，且功能化的多壁碳纳米管具有良好的生物相容性，能靶向地结合到癌细胞上，可用于癌细胞的早期靶向诊断；且制备方法简单，反应条件温和，易于操作，所用的聚合物均为环境友好的高分子材料，具有产业化实施的前景。

主权项

一种癌细胞靶向诊断聚酰胺胺/碳纳米管复合材料的制备方法，包括：(1)将多壁碳纳米管进行酸化处理2h，过滤，水洗，于60℃真空干燥，备用；(2)聚酰胺胺树状大分子的异硫氰酸荧光素FI和叶酸FA的修饰a.在含有60mg聚酰胺胺PAMAM的24mL无水二甲基亚砜DMSO溶剂中逐滴滴加含有4.4mg FI的24mL DMSO溶液，室温下强磁力搅拌24小时，随后将反应产物用纤维素透析膜逐次在PBS缓冲溶液4L×3和超纯水4L×3，透析3天，最后将纯化后的产物冷冻干燥得G5.NH2‑FI；或b.①在含有60mg PAMAM的24mL无水DMSO溶剂中逐滴滴加含有4.4mg FI的24mL DMSO溶液，室温下强磁力搅拌24小时，随后将反应产物用纤维素透析膜逐次在PBS缓冲溶液4L×3和超纯水4L×3，透析3天，最后将纯化后的产物冷冻干燥得G5.NH2‑FI；②将3.7mg FA和9.3mg 1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐EDC溶解在3mLDMSO溶液中，室温条件下磁力搅拌3小时，将反应后的溶液逐渐滴加到12mL含30mgG5.NH2‑FI的DMSO溶液中，室温条件下强磁力搅拌3天，将反应后的产物用纤维素透析膜逐次在PBS缓冲液4L×3和超纯水4L×3，透析3天，最后将纯化后的产物冷冻干燥得G5.NH2‑FI‑FA；(3)取16.68mg酸化处理后的多壁碳纳米管分散于12mL超纯水中，随后将含有12.82mg EDC的DMSO溶液2mL滴加到多壁碳纳米管的水溶液中，强磁力搅拌，反应3小时；(4)将含有4.6mg步骤(2)制备的修饰PAMAM树状大分子的1mL水溶液滴加到步骤(3)的所得溶液中，强磁力搅拌下反应48小时，即得CNT/G5.NH2‑FI‑FA或CNT/G5.NH2‑FI，并分散在超纯水溶液中、离心，重复3～6次；(5)将步骤(4)中制备的CNT/G5.NH2‑FI‑FA或CNT/G5.NH2‑FI复合物分散在10mL超纯水中，与9.8μL三乙胺溶液充分混合后，逐滴加入含7.2mg醋酸酐的甲醇溶液1mL，强磁力搅拌下反应24小时，制得表面电荷为中性的CNT/G5.NHAc‑FI‑FA或CNT/G5.NH2‑FI复合物；(6)将步骤(5)制备的复合物用纤维素透析膜逐次在PBS缓冲液4L×3和超纯水4L×3，透析3天，最后冷冻干燥保存。